[發明專利]特異性識別左旋咪唑的核酸適配體及其雙模式納米探針和應用

有效

• 申請號: 202210563028.0
• 申請日: 2022-05-23
• 公開（公告）號: CN115044587B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 段諾;李昌鑫;吳世嘉;宋銘倩;王周平
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C40B50/06;C12Q1/6806;C12N15/11;C12Q1/6876
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

1.一種特異性識別左旋咪唑的核酸適配體，其特征在于：所述核酸適配體的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1-3所示之一。

2.根據權利要求1所述的核酸適配體，其特征在于：所述核酸適配體的3′端或5′端修飾有功能基團或分子。

3.根據權利要求2所述的核酸適配體，其特征在于：所述功能基團或分子為同位素、電化學標記物、酶標記物、熒光基團、生物素、親和配基或巰基。

4.根據權利要求1所述的核酸適配體，其特征在于，所述核酸適配體的篩選方法包括以下步驟：構建初始文庫及SEQ?ID?NO.4-5所示核苷酸序列的引物對，進行親和力篩選和特異性篩選，得到所述特異性識別左旋咪唑的核酸適配體；

所述初始文庫的序列在結構上符合下述通式所示的結構特征：5′-AATCAAACGCTAAGG-N₁₀-GTGCACCCATTCTTG-N₃₀-AAGCTTGGTACCCGTATCGT-3′，其中N代表堿基A、T、C、G中的任一個，N₁₀代表隨機片段長度為10個堿基，N₃₀代表隨機片段長度為30個堿基。

5.一種基于左旋咪唑適配體的雙模式納米探針，其特征在于：所述雙模式納米探針包括權利要求1-4任一項所述的核酸適配體、互補鏈和納米片，所述納米片為AuNPs/Cu-TCPP(Fe)納米片或AuNPs/Co-TCPP(Fe)納米片；

所述核酸適配體通過磁珠進行固定，所述互補鏈與核酸適配體部分互補，互補鏈5′端或3′端修飾巰基且通過Au-S共價鍵與納米片連接。

6.根據權利要求5所述的雙模式納米探針，其特征在于：所述AuNPs/Cu-TCPP(Fe)納米片或AuNPs/Co-TCPP(Fe)納米片由金納米粒子負載于卟啉金屬有機框架Cu-TCPP(Fe)或Co-TCPP(Fe)上得到。

7.根據權利要求5所述的雙模式納米探針，其特征在于：所述核酸適配體通過生物素、親和素與磁珠連接。

8.根據權利要求5所述的雙模式納米探針，其特征在于：所述互補鏈的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示。

9.權利要求5-8任一項所述的雙模式納米探針的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將氯金酸與Cu-TCPP(Fe)或Co-TCPP(Fe)混合，在還原劑存在的條件下制備得到所述納米片；

(2)將巰基修飾的互補鏈與所述納米片孵育，得到互補鏈/納米片；

(3)將所述互補鏈/納米片與磁珠固定的核酸適配體孵育，得到所述雙模式納米探針。

10.權利要求1-4任一項所述的核酸適配體或權利要求5-8任一項所述的雙模式納米探針在檢測左旋咪唑中的應用。