[發(fā)明專利]一種脾臟調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210560315.6
• 申請(qǐng)日: 2022-05-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114686427B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱鳳閣;陳香美;蔡廣研;傅博;張歡平;陳欠欠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心
• 主分類號(hào): C12N5/0781
• 分類號(hào): C12N5/0781;G01N33/569;A61K35/17;A61P13/12
• 代理公司: 北京三友知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾;張德斌

本發(fā)明提供了一種脾臟調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明一方面提供了一種脾臟調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞，所述細(xì)胞中CD1d、CD5和CD21/35抗體陽(yáng)性調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞占比在94.6%以上。本發(fā)明第二方面提供一種制備脾臟調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞的方法。所述制備脾臟調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞的方法包括以下步驟：取脾臟細(xì)胞懸液，采用表面抗體CD1d、CD5和CD21/35標(biāo)記；熒光激活細(xì)胞分選術(shù)分選標(biāo)記的細(xì)胞。本發(fā)明第三方面提供上述脾臟調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞在制備靶向定植于雙側(cè)腎臟的制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明第四方面提供上述脾臟調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞在制備用于腎臟保護(hù)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是關(guān)于一種脾臟調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞及其制備方法與應(yīng)用，具體涉及熒光激活細(xì)胞分選術(shù)，屬細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

近年來(lái)，B淋巴細(xì)胞在纖維化中的作用已逐漸引起重視。B淋巴細(xì)胞耗竭療法對(duì)于免疫細(xì)胞亞群構(gòu)成，成纖維細(xì)胞表型表達(dá)均有潛在的調(diào)節(jié)作用，這可能是其發(fā)揮抗纖維化作用的途徑之一。

考慮到B淋巴細(xì)胞亞群表型的復(fù)雜性，針對(duì)單一表面抗原的B淋巴細(xì)胞耗竭療法可能并不能普適于所有類型的腎小球腎炎及其誘導(dǎo)的間質(zhì)纖維化。靶向于單一表面抗原，尤其是單一廣譜表面抗原的B淋巴細(xì)胞耗竭治療之所以在部分疾病和患者中無(wú)法適用，可能與B淋巴細(xì)胞中自身存在不同功能的亞群相關(guān)。

尤其值得注意的是，在B淋巴細(xì)胞中有一個(gè)具有免疫調(diào)節(jié)功能的特殊亞群，被稱為調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞（regulatory B lymphocytes, Breg），也有學(xué)者稱其為B10細(xì)胞。Breg細(xì)胞在人體血液循環(huán)中僅占全部B淋巴細(xì)胞的10%左右，但是Breg對(duì)于免疫耐受和免疫穩(wěn)態(tài)的維持具有不可或缺的作用。據(jù)報(bào)道，Breg細(xì)胞是產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-10的主要細(xì)胞類型，這也是它們有時(shí)被叫做B10細(xì)胞的原因。Breg細(xì)胞能夠抑制Th1類免疫反應(yīng)，抑制Th17細(xì)胞分化，也能將CD4⁺ T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為抑制性的調(diào)節(jié)型T淋巴細(xì)胞（regulatory T lymphocytes，Treg）和1型調(diào)節(jié)性細(xì)胞（Tr1）。

在目前已知的B淋巴細(xì)胞亞群中，Breg細(xì)胞表現(xiàn)出以下特征：

a. 具有表型的可塑性（plasticity）：既能向產(chǎn)免疫球蛋白的漿細(xì)胞分化，也能向長(zhǎng)期存留的記憶性B淋巴細(xì)胞分化；

b. 具有對(duì)其他類型免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)功能：能夠誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的分化，維持Treg細(xì)胞群落的穩(wěn)定；

c. 具有分泌功能：Breg細(xì)胞是調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子IL-10的主要貢獻(xiàn)者；

d. 已在多種免疫相關(guān)疾病的動(dòng)物模型中表現(xiàn)出富有前景的治療效果，例如實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓膜炎（人類多發(fā)性硬化的動(dòng)物模型之一），風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，實(shí)驗(yàn)性狼瘡性腎炎中，Breg細(xì)胞均顯示出了良好的治療潛力。

秦瑤，于2014年5月1日發(fā)表的南京醫(yī)科大學(xué)碩士論文，CD19⁺CD5⁺CD1d^hi B細(xì)胞對(duì)胰島移植免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究，中使用了制備Breg細(xì)胞的常規(guī)方法：MACS（Magnetic-activated cell sorting，磁活性標(biāo)記細(xì)胞分選術(shù)）分選小鼠CD19^＋B細(xì)胞，體外活化48h，進(jìn)一步利用FACS分選獲得CD19⁺CD5⁺CD1d^hi B細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種脾臟調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種制備脾臟調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種脾臟調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞在制備靶向定植于雙側(cè)腎臟的制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種脾臟調(diào)節(jié)型B淋巴細(xì)胞在制備用于腎臟保護(hù)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。