[發明專利]一種用于富集mRNA的磁珠復合物及其應用

在審

• 申請號: 202210550512.X
• 申請日: 2022-05-18
• 公開（公告）號: CN114854827A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 雍軍;范靜彥;包仁艷
• 申請（專利權）人: 蘇州極客基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6869
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 周淑歌

1.一種用于富集mRNA的磁珠復合物，其特征在于，所述用于富集mRNA的磁珠復合物包括磁珠、間臂、引物以及oligodT；所述引物通過間臂偶聯在磁珠上；所述oligodT通過引物與間臂相連；所述間臂為C鏈和/或堿基T；所述引物用于擴增目標mRNA經過反轉錄后結合在磁珠上的cDNA；所述oligodT能夠與目標mRNA特異性結合。

2.如權利要求1所述的用于富集mRNA的磁珠復合物，其特征在于，所述間臂為長度2～30的碳鏈C和/或長度2～30的堿基T。

3.如權利要求1或2所述的用于富集mRNA的磁珠復合物，其特征在于，所述引物的長度為12～70個堿基。

4.如權利要求1～3任一項所述的用于富集mRNA的磁珠復合物，其特征在于，所述oligodT的長度為12～70個堿基T。

5.一種制備權利要求1～4任一項所述的用于富集mRNA的磁珠復合物的方法，其特征在于，所述方法為：合成間臂、引物和oligodT，并將間臂、引物和oligodT依次相連，得到磁珠連接序列；將磁珠和磁珠連接序列混合后進行偶聯反應，得到權利要求1～4任一項所述的用于富集mRNA的磁珠復合物。

6.一種用于富集mRNA的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含權利要求1～4任一項所述的用于富集mRNA的磁珠復合物。

7.如權利要求6所述的用于富集mRNA的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含裂解緩沖液；所述裂解緩沖液的成分包含1％Triton X-100 2μL和4M鹽酸胍/異硫氰酸胍2μL；或者，所述裂解緩沖液的成分包含1％Triton X-1002μL、40U/μL RNase inhibitor 0.1μL、2MLiCl 1μL和DEPC H₂O 1μL；或者，所述裂解緩沖液的成分包含1％Triton X-100 2μL、40U/μL RNase inhibitor 0.1μL、2M LiCl 0.5μL和DEPC H₂O 1μL；或者，所述裂解緩沖液的成分包含1％Triton X-100 2μL、40U/μL RNase inhibitor 0.1μL、2M LiCl 0.5μL、DEPC H₂O 1μL和1％β巰基乙醇0.04μL；或者，所述裂解緩沖液的成分包含1％Triton X-100 2μL、40U/μL RNase inhibitor 0.1μL、2M LiCl 0.5μL、DEPC H₂O 1μL和1％二硫蘇糖醇0.04μL。

8.如權利要求6或7所述的用于富集mRNA的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含雜交緩沖液；所述雜交緩沖液為添加有1.0M LiCl、2mM EDTA、5mM DTT以及10％甲酰胺的20mM、pH 7.5的Tris-HCl緩沖液。

9.一種單細胞/少量細胞轉錄組擴增及測序方法，其特征在于，所述方法為：使用權利要求1～4任一項所述的用于富集mRNA的磁珠復合物或權利要求6～8任一項所述的用于富集mRNA的試劑盒對單細胞/少量細胞中的目標mRNA進行捕獲和擴增。

10.權利要求1～4任一項所述的用于富集mRNA的磁珠復合物或權利要求6～8任一項所述的用于富集mRNA的試劑盒或權利要求9所述的單細胞/少量細胞轉錄組擴增及測序方法在單細胞/少量細胞轉錄組擴增及測序中的應用。