[發(fā)明專利]一種表達豬PRV gDFc或gBFc融合蛋白的重組CHO細胞系及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210547481.2
• 申請日: 2022-05-18
• 公開（公告）號: CN114908056A
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 錢平;任旭皎;李祥敏;榮振香
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/62;C12N15/85;C12N15/66;C07K19/00;A61K39/245;A61P31/22
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 薛紅凡

本發(fā)明提供了一種表達豬偽狂犬病病毒gDFc或gBFc融合蛋白的重組CHO細胞系及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，屬于疫苗技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的重組CHO細胞系表達PRVgDFc或gBFc用于制備亞單位疫苗，免疫小鼠后能夠產(chǎn)生較強的針對PRV的特異性免疫反應(yīng)。利用本發(fā)明制備的重組CHO細胞系能夠獲得二聚體形態(tài)的gDFc和/或gBFc蛋白抗原，制備的亞單位疫苗能夠激起機體產(chǎn)生強烈的體液免疫和細胞免疫反應(yīng)，并對小鼠產(chǎn)生很好的保護效果，可作為一種很有前景的候選基因工程疫苗來預(yù)防豬偽狂犬病。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于疫苗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種表達豬偽狂犬病病毒(PRV) gDFc或gBFc融合蛋白的重組CHO細胞系及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

偽狂犬病(Pseudorabies，PR)，又稱奧耶斯基氏病(Aujeszky's disease)，是豬的一種急性發(fā)熱性傳染病，由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV) 引起^[1,2]。PR在豬中的主要臨床特征為繁殖障礙、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和呼吸疾病^[3–5]。由于感染PRV后，母豬的繁殖能力下降和成年豬體重減輕，該疾病可導(dǎo)致巨大的經(jīng)濟損失^[2]。目前，一些基于DIVA(區(qū)分感染者和接種者)疫苗接種計劃的策略被應(yīng)用于根除商業(yè)豬群中的PR^[6]。一些發(fā)達國家，如美國^[3]、幾個歐洲國家^[7]和新西蘭^[8]，已經(jīng)根除PR。而自2011年以來，中國的豬群和其他動物感染頻率和嚴重程度的增加再次導(dǎo)致PR流行^[9]。因此，更有效的疫苗被認為是預(yù)防PRV的必要工具。

PRV是皰疹病毒科(Herpesviridae)，α-皰疹病毒亞科 (Alphaherpesvirinae)的成員，由大約150kb的雙鏈DNA基因組組成，分為一個獨特的長區(qū)(UL)和一個獨特的短區(qū)(US)。包含70個開放閱讀框，編碼70-100個病毒蛋白：16種膜蛋白，其中11種糖蛋白gB、gC、gD、gE、 gG、gH、gI、gK、gL、gM和gN^[3,10]。迄今為止，據(jù)報道所有活PRV疫苗株都含有一個或多個基因缺失^[11,12]。已經(jīng)報道了幾種基于PRV變體的疫苗，例如基于天津株的gE/gI基因缺失PRV、基于ZJ01株的gE/gI基因缺失PRV 和基于PR HN1201株的TK/gE/gI基因缺失疫苗^[13–15]。由于PRV減毒活疫苗仍然可能存在毒力返強等安全性風(fēng)險。因此，開發(fā)一種安全有效的PRV疫苗對于豬偽狂犬病的防控至關(guān)重要。

參考文獻

[1]Li,X.；Zhang,W.；Liu,Y.；Xie,J.；Hu,C.；Wang,X.,Role of p53 inpseudorabies virus replication,pathogenicity,and host immune responses.Veterinary research 2019,50,(1),9.

[2]Pomeranz,L.E.；Reynolds,A.E.；Hengartner,C.J.,Molecular biology ofpseudorabies virus:impact on neurovirology and veterinary medicine.Microbiology and molecularbiology reviews:MMBR 2005,69,(3),462-500.

[3]Klupp,B.G.；Hengartner,C.J.；Mettenleiter,T.C.；Enquist,L.W.,Complete,annotated sequence of the pseudorabies virus genome.Journal ofvirology 2004,78,(1),424-40.