[發(fā)明專利]一種表達(dá)豬PRV gDFc或gBFc融合蛋白的重組CHO細(xì)胞系及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210547481.2
• 申請(qǐng)日: 2022-05-18
• 公開（公告）號(hào): CN114908056A
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢平;任旭皎;李祥敏;榮振香
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/62;C12N15/85;C12N15/66;C07K19/00;A61K39/245;A61P31/22
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 薛紅凡

1.一種表達(dá)豬偽狂犬病病毒gDFc或gBFc融合蛋白重組CHO細(xì)胞系的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)人工合成密碼子優(yōu)化的編碼PRV gD蛋白和豬源IgG3Fc蛋白的序列，將gD序列和IgG3Fc序列分別連接至pUC57載體中，得到pUC57-gD和pUC57-IgG3Fc；

2)人工合成密碼子優(yōu)化的編碼PRV gB蛋白的序列，連接至pUC57載體中，得到pUC57-gB；

3)將步驟1)中所述pUC57-gD經(jīng)酶切處理，回收gD基因克隆至相同酶切處理后的pEE12.4，得到pEE12.4-gD；

4)將步驟1)中所述pUC57-IgG3Fc經(jīng)酶切處理，回收IgG3Fc基因，克隆至相同酶切處理后的pEE12.4-gD，得到pEE12.4-gDFc；

5)將步驟2)中所述pUC57-gB經(jīng)酶切處理，回收gB基因，克隆至相同酶切處理后的pEE12.4-gDFc，得到pEE12.4-gBFc；

6)將步驟4)所述pEE12.4-gDFc或步驟5)所述pEE12.4-gBFc轉(zhuǎn)染至CHO-S細(xì)胞，經(jīng)篩選、細(xì)胞克隆后，得到重組CHO細(xì)胞系CHO-S-gDFc或CHO-S-gBFc；

其中，步驟1)和步驟2)之間沒有時(shí)間順序的限制。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述構(gòu)建方法，其特征在于，步驟1)中所述密碼子優(yōu)化的編碼PRV gD蛋白的序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述構(gòu)建方法，其特征在于，步驟1)中所述密碼子優(yōu)化的編碼IgG3Fc蛋白的序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述構(gòu)建方法，其特征在于，步驟2)中所述密碼子優(yōu)化的編碼PRV gB蛋白的序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述構(gòu)建方法，其特征在于，步驟1)中所述密碼子優(yōu)化的編碼PRV gD蛋白的序列的5'端還包含編碼IL-2信號(hào)肽的序列，

所述密碼子優(yōu)化的編碼IgG3Fc蛋白的序列的3'端還含有編碼8×His的序列；

所述編碼IL-2信號(hào)肽的序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

所述編碼8×His的序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

6.根據(jù)權(quán)利要1所述構(gòu)建方法，其特征在于，步驟2)中密碼子優(yōu)化的編碼PRV gB蛋白的序列含有編碼Igκ信號(hào)肽的序列；

所述編碼Igκ信號(hào)肽的序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

7.權(quán)利要求1～6任意一項(xiàng)所述制備方法制備得到的表達(dá)PRV gDFc或gBFc重組CHO細(xì)胞系。

8.一種具有豬偽狂犬病毒免疫原性的融合蛋白，其特征在于，為權(quán)利要求7所述重組CHO細(xì)胞系表達(dá)得到的gDFc融合蛋白和/或gBFc融合蛋白；

所述gDFc融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；

所述gBFc融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

9.權(quán)利要求7所述重組CHO細(xì)胞系或權(quán)利要求8所述融合蛋白在制備預(yù)防豬偽狂犬病的疫苗中的應(yīng)用。

10.一種預(yù)防豬偽狂犬病的疫苗，其特征在于，包括權(quán)利要求8所述融合蛋白和佐劑。