[發(fā)明專利]顱縫早閉癥小鼠模型、其構(gòu)建方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210543331.4
• 申請(qǐng)日: 2022-05-19
• 公開（公告）號(hào): CN114731987B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田靜;王志浩;張東偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華芯微魚（蘇州）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A01K67/027
• 分類號(hào): A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 蘇州謹(jǐn)和知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32295
• 代理人: 許冬瑩

本申請(qǐng)具體涉及一種顱縫早閉癥小鼠模型、其構(gòu)建方法及應(yīng)用，該構(gòu)建方法包括：S1、提供Rosa26supgt;FGFR2/supgt;和Sp7?CRE小鼠；S2、將Rosa26supgt;FGFR2/supgt;小鼠進(jìn)行自交，得到具有Rosa26supgt;FGFR2/supgt;陽性表達(dá)的F1代小鼠；將Sp7?CRE小鼠進(jìn)行自交，得到Sp7?CRE陽性表達(dá)的F1代小鼠；S3、將Rosa26supgt;FGFR2/supgt;?F1代小鼠和Sp7?CRE?F1代小鼠進(jìn)行雜交，得到F2代小鼠，表現(xiàn)為Rosa26supgt;FGFR2/supgt;和Sp7?CRE雙陽性的即為所述顱縫早閉癥小鼠模型。根據(jù)本申請(qǐng)的構(gòu)建方法所構(gòu)建的顱縫早閉癥小鼠模型能篩選出具有穩(wěn)定的顱縫早閉病理表型的小鼠模型，在實(shí)際應(yīng)用中方便研究FGFR2基因在小鼠遺傳性顱縫早閉癥中的作用機(jī)制。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請(qǐng)涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種顱縫早閉癥小鼠模型、其構(gòu)建方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

先天性顱縫早閉癥是顱骨一個(gè)或多個(gè)顱縫發(fā)生過早的骨性融合，顱縫旁的顱骨及腦組織生長受限，導(dǎo)致顱腔和眶腔狹小、顱內(nèi)高壓、顱頜面畸形的疾病。顱縫早閉癥是最常見的先天性顱頜面畸形之一，新生兒中發(fā)病率為0.03％～0.05％，居常見顱面發(fā)育畸形發(fā)病率的第2位(約為1/2000，僅次于唇腭裂畸形)。顱縫早閉發(fā)生于胚胎期，出生后隨著年齡增長逐漸加重。顱縫早閉不僅造成顱面骨骼發(fā)育異常，更嚴(yán)重的是使患兒的大腦發(fā)育受到限制。對(duì)于先天性顱縫早閉癥的早期診斷、早期治療，保障大腦生長發(fā)育及視覺功能等顯得尤為重要。

目前需要提供一種具有穩(wěn)定的顱縫早閉病理表型的小鼠模型和相應(yīng)的構(gòu)建方法，基于此，提出本申請(qǐng)。

發(fā)明內(nèi)容

本申請(qǐng)的目的在于提供一種顱縫早閉癥小鼠模型、其構(gòu)建方法及應(yīng)用，能篩選出具有穩(wěn)定的顱縫早閉病理表型的小鼠模型。

為達(dá)到上述目的，本申請(qǐng)?zhí)峁┤缦录夹g(shù)方案：

第一方面，提供一種顱縫早閉癥小鼠模型的構(gòu)建方法，其包括：

S1、提供Rosa26^FGFR2小鼠和Sp7-CRE小鼠；

S2、將Rosa26^FGFR2小鼠進(jìn)行自交，得到Rosa26^FGFR2-F1代小鼠；將Sp7-CRE小鼠進(jìn)行自交，得到Sp7-CRE-F1代小鼠；

S3、將Rosa26^FGFR2-F1代小鼠和Sp7-CRE-F1代小鼠進(jìn)行雜交，得到F2代小鼠，表現(xiàn)為Rosa26^FGFR2:Sp7-CRE雙陽性的即為所述顱縫早閉癥小鼠模型。

在一些可能的實(shí)施方式中，所述Rosa26^FGFR2小鼠和Sp7-CRE小鼠的基因型分別為Rosa26^FGFR2/+和Sp7-CRE^+/-。

在一些可能的實(shí)施方式中，所述提供Rosa26^FGFR2小鼠和Sp7-CRE小鼠包括：

用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建Rosa26基因中LoxP-FGFR2條件性過表達(dá)小鼠，獲得Rosa26^FGFR2/+小鼠；

用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建Sp7基因啟動(dòng)子區(qū)域攜帶CRE元件的Sp7-CRE雜合小鼠。

在一些可能的實(shí)施方式中，在所述用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建Rosa26基因中LoxP-FGFR2條件性過表達(dá)小鼠，獲得Rosa26^FGFR2/+小鼠中，所采用的檢測(cè)引物WT-F、WT-R、FGFR2-F和FGFR2-R的序列分別如SEQ?ID?NO.1至SEQ?ID?NO.4所示。