[發(fā)明專利]顱縫早閉癥小鼠模型、其構(gòu)建方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210543331.4
• 申請日: 2022-05-19
• 公開（公告）號: CN114731987B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田靜;王志浩;張東偉
• 申請（專利權(quán)）人: 華芯微魚（蘇州）生物科技有限公司
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 蘇州謹(jǐn)和知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32295
• 代理人: 許冬瑩

1.一種顱縫早閉癥小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括：?S1、提供?Rosa26^FGFR2?小鼠和?Sp7-CRE?小鼠；

S2、將?Rosa26^FGFR2?小鼠進(jìn)行自交，得到?Rosa26^FGFR2?陽性表達(dá)的F1?代小鼠；?將Sp7-CRE?小鼠進(jìn)行自交，得到?Sp7-CRE?陽性表達(dá)的?F1?代小鼠；

S3、將Rosa26^FGFR2-F1?代小鼠和?Sp7-CRE-F1?代小鼠進(jìn)行雜交，得到F2?代小鼠，表現(xiàn)為Rosa26^FGFR2:Sp7-CRE?雙陽性的即為所述顱縫早閉癥小鼠模型；

其中，所述Rosa26^FGFR2?小鼠和?Sp7-CRE?小鼠的基因型分別為?Rosa26^FGFR2/+

和Sp7-CRE^+/-，提供所述?Rosa26^FGFR2?小鼠和所述Sp7-CRE?小鼠的步驟包括：?用CRISPR/Cas9?技術(shù)構(gòu)建Rosa26?基因中?LoxP-FGFR2?條件性過表達(dá)小鼠，

獲得Rosa26^FGFR2/+小鼠；

用CRISPR/Cas9?技術(shù)構(gòu)建Sp7?基因啟動子區(qū)域攜帶CRE?元件的Sp7-CRE^+/-

雜合小鼠。

2.如權(quán)利要求?1?所述的構(gòu)建方法，其特征在于，在所述用?CRISPR/Cas9?技術(shù)構(gòu)建Rosa26?基因中LoxP-FGFR2?過表達(dá)小鼠，獲得?Rosa26^FGFR2?小鼠中，所采用的檢測引物WT-F、WT-R、FGFR2-F?和FGFR2-R?的序列分別如SEQ?ID?NO.1?至SEQ?ID?NO.4?所示。

3.如權(quán)利要求?2?所述的構(gòu)建方法，其特征在于，在所述用?CRISPR/Cas9?技術(shù)構(gòu)建Sp7基因啟動子區(qū)域攜帶?CRE?元件的Sp7-CRE^+/-雜合小鼠中，所采用的檢測引物Transgene-F、Transgene-R、Control-F?和Control-R?的序列分別如SEQ?ID?NO.5?至SEQ?ID?NO.8?所示。

4.如權(quán)利要求?3?所述的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟?S3?中，還包括利用PCR?方法對所述?Rosa26^FGFR2?和Sp7-CRE?雙陽性小鼠進(jìn)行鑒定篩選，當(dāng)?PCR?驗(yàn)證出的目的條帶同時包括?SEQ?ID?NO.3?至SEQ?ID?NO.6?中兩條條帶時，認(rèn)為得到Rosa26^FGFR2:Sp7-CRE?雙陽性小鼠。

5.如權(quán)利要求?1?所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述Rosa26^FGFR2-F1?代小鼠的基因型包括?Rosa26^FGFR2/+和Rosa26^FGFR2/FGFR2；和/或，所述Sp7-CRE-F1?代小鼠的基因型包括Sp7-CRE^+/-和Sp7-CRE^-/-。

6.如權(quán)利要求?5?所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述顱縫早閉癥小鼠模型的基因型包括Rosa26^{FGFR2/+:Sp7-CRE+/-}、Rosa26?^FGFR2/FGFR2:Sp7-CRE^+/-、Rosa26^{FGFR2/+:Sp7-CRE-/-}和Rosa26?^FGFR2/FGFR2:Sp7-CRE^-/-。

7.一種權(quán)利要求?1?至?6?中任一項(xiàng)所述的構(gòu)建方法所述的小鼠模型或其子代在不以疾病的診斷和治療為目的的顱縫早閉綜合癥相關(guān)領(lǐng)域的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括在制備或篩選預(yù)防、診斷或者治療顱縫早閉綜合癥藥物的用途。