[發明專利]一種一日齡種鴨常見垂傳播病原的病料采集及檢測方法

在審

• 申請號: 202210532107.5
• 申請日: 2022-05-09
• 公開（公告）號: CN114891857A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 張中波;王勝;褚新星;汪建華;許明清
• 申請（專利權）人: 山東和康源生物育種股份有限公司;寧陽正和生物育種有限公司;山東寧陽和櫻種鴨有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/04;C12Q1/10;C12N15/11;A61B5/15;A61B5/153;A61B10/00;C12R1/42;C12R1/01;C12R1/93
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 周瑜

本發明公開了一種一日齡種鴨常見垂傳播病原的病料采集及檢測方法，屬于禽病學分子學診斷技術領域，該一種一日齡種鴨常見垂傳播病原的病料采集及檢測方法，步驟一、雛鴨的頸上部緊靠頭的位置采集血氧待用，解剖一日齡種鴨，獲取內臟和組織，泄殖腔棉拭子采樣，步驟二、首先利用內臟和組織對沙門氏菌、鴨疫里默氏桿菌進行分離鑒定，同時檢測垂直傳播病毒。病料采集方法包括：采集血液、卵黃囊、肝臟、泄殖腔棉拭子等，對種鴨垂傳病原的樣品采集，通過對采集的樣品進行PCR檢測，可檢測雛鴨是否感染常見垂直傳播病原，本發明簡單方便、特異性強，通過對雛鴨的常見垂直傳播病原的檢測，有利于種鴨早期的疾病防控和凈化。

技術領域

本發明涉及禽病學分子學診斷技術領域，具體為一種一日齡種鴨常見垂傳播病原的病料采集及檢測方法。

背景技術

種鴨垂直傳播疾病是指種鴨所帶有的某種疾病其病原體可經卵黃、種蛋、蛋表等直接傳播給后代孵化鴨苗，垂直傳播病原均可以水平傳播，造成鴨苗早期感染發病，引發鴨苗早期的大面漆感染，造成鴨苗生長出現問題，甚至發病死亡，給養鴨業造成巨大的經濟損失。

鴨苗一般常見的垂傳細菌性疾病有沙門氏菌、鴨疫里默氏桿菌，垂傳病毒病包括禽流感病毒、鴨呼腸孤病毒、鴨坦布蘇病毒、鴨細小病毒、鴨肝炎病毒。

種鴨垂直傳播病的控制，最重要的就是在于早期的檢測、預防，因此針對早期鴨苗垂傳疾病進行檢測非常重要，鴨苗早期樣品采集是鴨苗質量檢測的重要環節，關系到檢測的準確率與時效性，現有的檢測方法，沒有辦法做到早期的檢測、預防，只能在發生大規模感染時，確定病因，協助進行治療。

發明內容

本發明提供的發明目的在于提供一種一日齡種鴨常見垂傳播病原的病料采集及檢測方法。該一日齡種鴨常見垂傳播病原的病料采集及檢測方法，為了改善現有鴨苗早期的檢測手段，針對帶病種鴨進行早期控制，而提供一種一日齡種鴨常見垂直傳播病原的病料采集及檢測方法，本發明的雛鴨的病料采集及檢測方法，病料采集方法包括：采集血液、卵黃囊、肝臟、泄殖腔棉拭子等，對種鴨垂傳病原的樣品采集，通過對采集的樣品進行PCR檢測，可檢測雛鴨是否感染常見垂直傳播病原，本發明簡單方便、特異性強，通過對雛鴨的常見垂直傳播病原的檢測，有利于種鴨早期的疾病防控和凈化。

為了實現上述效果，本發明提供如下技術方案：一種一日齡種鴨常見垂傳播病原的病料采集及檢測方法，包括以下步驟：

步驟一、雛鴨的頸上部緊靠頭的位置采集血氧待用，解剖一日齡種鴨，獲取內臟和組織，泄殖腔棉拭子采樣；

步驟二、首先利用內臟和組織對沙門氏菌、鴨疫里默氏桿菌進行分離鑒定，同時檢測垂直傳播病毒；

步驟三、待檢雛鴨用消毒液將羽毛打濕，置于剖檢臺，點燃酒精燈，打開腹腔，灼燒吊菌環，無菌采集肝臟、腦組織，5％血清瓊脂培養基劃線分離；

步驟四、采集的組織樣品進行研磨處理后，對禽流感病毒、呼腸孤病毒、鴨坦布蘇病毒、新型鴨細小病毒、鴨肝炎病毒的進行檢測，取離心后的上清液提取病毒RNA或DNA，RNA反轉錄為cDNA后進行PCR擴增，DNA進行PCR擴增可以得到相應病毒的目的片段，隨后測序，確定是否感染病毒。

進一步的，根據步驟一中的操作步驟，所述采好的血樣要豎立放置，避免受冷和振動，在25-37℃環境中靜置10-30min，這樣有利于血液凝固和析出血清，否則容易發生溶血，然后放置4℃冰箱不少于4小時，待纖維蛋白收縮后，將血液以3000r/min離心10分鐘，取血清作為待檢樣品。

進一步的，根據步驟一中的操作步驟，所述雛鴨體表進行消毒，從腹部剪開羽毛皮膚，打開腹腔漏出內臟，采集臟器主要有肝臟、脾臟、腎臟、肺臟、胰腺、腦等組織臟器，未吸收完全的卵黃單獨摘除，防止破裂撒體腔內，在樣品采集選擇上，最好多選取幾只病料進行集中混合，防止個體選擇上造成漏檢，同時根據重點疫病特點，選取針對性病毒含量高的部位進行采集，所采集的組織臟器不宜過大，一般采集2×2cm大小的組織即可，較小的臟器可以全部取出。