[發(fā)明專利]一種能夠穩(wěn)定傳代的脊髓膠質瘤組織塊及其凍存和復蘇方法

有效

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• 申請日: 2022-05-16
• 公開（公告）號: CN114634912B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發(fā)明（設計）人: 柴睿超;王永志;龐波;賈文清;安崧源;張耀武
• 申請（專利權）人: 北京市神經外科研究所
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/079;C12Q1/02;A01N1/02;C12R1/91
• 代理公司: 北京英創(chuàng)嘉友知識產權代理事務所(普通合伙) 11447
• 代理人: 耿超

本發(fā)明提供了一種脊髓膠質瘤組織塊，所述脊髓膠質瘤組織塊的保藏編號為CGMCC No.23030，該脊髓膠質瘤組織塊能夠在動物體內穩(wěn)定傳代，維持親代膠質瘤的遺傳特征并反映人類患者群體的異質性和多樣性，在藥物開發(fā)和腫瘤學研究領域具有重要意義。

技術領域

本申請涉及生物醫(yī)學領域，具體地，涉及一種能夠穩(wěn)定傳代的脊髓膠質瘤組織塊及其凍存和復蘇方法。

背景技術

腫瘤（tumour）是指機體在各種致瘤因子作用下，局部組織細胞增生所形成的新生物（neogrowth），因為這種新生物多呈占位性塊狀突起，也稱贅生物（neoplasm）。研究發(fā)現，腫瘤細胞會出現不同于正常細胞的代謝變化，同時腫瘤細胞自身可通過糖酵解和氧化磷酸化（OXPHOS）之間的轉換來適應代謝環(huán)境的改變。

脊髓膠質瘤是一種發(fā)生于椎管內髓內惡性腫瘤，與腦膠質瘤相比，其發(fā)病率較低，好發(fā)于青少年、有著獨特的分子遺傳特點。高級別脊髓膠質瘤從放化療中獲益有限，亟需依據脊髓星形細胞瘤自身特點來探索新的治療方法。然而，脊髓膠質瘤尚沒有可以開展基礎實驗研究的動物和細胞模型。建立可供研究脊髓膠質瘤生物學特征和治療評估的動物脊髓膠質瘤模型顯得尤為迫切。

因此，獲得永生化、質量均一并且能夠保留原腫瘤的生物學特性脊髓膠質瘤組織是實現臨床治療相關研究的基礎和關鍵。

發(fā)明內容

本公開的目的在于提供一種能夠穩(wěn)定傳代的脊髓膠質瘤組織塊及其凍存和復蘇方法，以解決現有技術中脊髓膠質瘤組織占比低、不易存活等導致不能對其充分探究等問題。

為了實現上述目的，本公開第一方面提供了一種分離的并且能夠連續(xù)穩(wěn)定傳代培養(yǎng)的脊髓膠質瘤組織塊，所述脊髓膠質瘤組織塊的保藏編號為CGMCC No.23030。

根據本公開，其中，所述脊髓膠質瘤組織塊能夠在實驗動物體內連續(xù)穩(wěn)定地傳代培養(yǎng)。

根據本公開，其中，所述實驗動物為大鼠或小鼠，優(yōu)選為NPG小鼠。

另一方面，本公開提供了上述脊髓膠質瘤組織塊的凍存方法，該方法包括如下步驟：

S1、利用磷酸鹽緩沖液清洗待凍存的脊髓膠質瘤組織；

S2、將清洗后的脊髓膠質瘤組織剪成組織塊，并使用磷酸鹽緩沖液再次沖洗所述組織塊；

S3、向沖洗后的組織塊中加入預冷的凍存液，重懸所述組織塊，然后分裝至凍存管中；

S4、將步驟S3獲得的裝有組織塊的凍存管依次進行：3-5℃冷藏3-5h，15-25℃冷藏5-7h，零下70~零下90℃冷凍7-9h，最后在液氮中冷凍保存。

根據本公開，其中，所述預冷的凍存液包括含8-12體積%的二甲基亞砜的胎牛血清凍存液。

根據本公開，其中，步驟S3中所述預冷的凍存液的體積為所述組織塊體積的10-20倍。

根據本公開，其中，所述組織塊的長度為1-3mm，截面積為1-6mm²。

根據本公開，其中，步驟S3中所述預冷的凍存液包括含8-12體積%的二甲基亞砜的胎牛血清凍存液。

另一方面，本公開提供了第一方面所述脊髓膠質瘤組織塊的復蘇方法，其中，該方法包括：將利用上述凍存方法凍存得到的所述脊髓膠質瘤組織從液氮中取出，放置在35-38℃的水浴中解凍至融化，然后加入生理鹽水混勻，再離心去掉上清液，得到復蘇后的脊髓膠質瘤組織塊。

另一方面，本公開提供了第一方面所述脊髓膠質瘤組織塊在篩選治療脊髓膠質瘤藥物中的用途。