[發明專利]利用煙酰胺發酵生產NMN的基因工程菌的構建與應用

在審

• 申請號: 202210529023.6
• 申請日: 2022-05-16
• 公開（公告）號: CN114836495A
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 李冰;石磊;蔡孟浩;任燕娜
• 申請（專利權）人: 藍色光鑰(上海)智能科技有限公司
• 主分類號: C12P19/30
• 分類號: C12P19/30;C12N1/19;C12N15/81;C12N15/54;C12N15/31;C12R1/84
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種生產煙酰胺單核苷酸的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供酵母工程菌，所述酵母工程菌中轉化有下組基因的表達盒：NiaP，PnuC以及Nampt；所述Nampt選自Nampt3、Nampt2或Nampt1；

(2)培養(1)的酵母工程菌，添加煙酰胺作為底物生成煙酰胺單核苷酸產物，收獲產物。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，培養(1)的酵母工程菌后，直接添加煙酰胺作為底物生成煙酰胺單核苷酸產物；

較佳地，培養(1)的酵母工程菌后，不包括進行細胞收集和/或濃縮的步驟，直接添加底物和進行產物的生產。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的表達盒中還包括啟動子，所述的啟動子包括：組成型啟動子或甲醇誘導型啟動子；

較佳地，所述的組成型啟動子包括GAP啟動子；

較佳地，所述的甲醇誘導型啟動子包括：AOX1啟動。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的培養酵母工程菌所用的培養基包括：YPD、YPG、YPM培養基；和/或

在培養過程中，補加葡萄糖；較佳地，間隔補加或流加葡萄糖；更佳地，所述間隔補加包括：發酵過程中每12～36h向液體培養基中添加1～5％(m/v)的葡萄糖；和/或

底物的添加量為5～20g/L，較佳地7～15g/L，更佳地8～12g/L；和/或

培養基pH 5.8～6.6，較佳地pH6.0～6.4，更佳地pH6.1～6.3；

于30±2℃、轉速200±50r/min培養；較佳地培養1.5～10天。

5.如權利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述的酵母工程菌是畢赤酵母(Pichia pastoris)；較佳地，所述的畢赤酵母是畢赤酵母GS115或Δku70。

6.一種利用煙酰胺生產煙酰胺單核苷酸的酵母工程菌，其特征在于，所述酵母工程菌中包含下組基因的表達盒：NiaP，PnuC以及Nampt；所述Nampt選自Nampt3、Nampt2或Nampt1。

7.權利要求6所述的酵母工程菌的應用，用于以煙酰胺為底物生產煙酰胺單核苷酸。

8.一種基因組合的用途，所述的基因組合包括下組基因：NiaP，PnuC以及Nampt；所述Nampt選自Nampt3、Nampt2或Nampt1；該基因組合用于轉化酵母工程菌，以煙酰胺為底物生產煙酰胺單核苷酸。

9.一種用于生產煙酰胺單核苷酸的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中包括：權利要求6所述的酵母工程菌。

10.如權利要求9所述的用于生產煙酰胺單核苷酸的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中還包含：

培養酵母工程菌所用的培養基；較佳地包括：YPD、YPG、YPM培養基；

葡萄糖；和/或

煙酰胺。