[發明專利]豬口蹄疫病毒O型和A型抗體微孔板式化學發光檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202210527645.5
• 申請日: 2022-05-16
• 公開（公告）號: CN114705857B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 王新杰;曾政;董春霞;駱璐;陳峰;白雪冬;孫曉明;費磊;陳匯鑫;張遠亮
• 申請（專利權）人: 北京億森寶生物科技有限公司;重慶市動物疫病預防控制中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58;G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

本發明公開了一種豬口蹄疫病毒O型和A型抗體微孔板式化學發光檢測試劑盒及其應用，所述試劑盒包含化學發光包被板、酶標抗體、血清稀釋液、O型陽性對照血清、A型陽性對照血清、陰性對照血清、發光底物A、發光底物B和10倍濃縮洗滌液。本發明所述試劑盒，能同時檢測并區分O型和A型豬口蹄疫病毒，具有良好的敏感性、特異性和診斷能力，重復性與穩定性也良好。

技術領域

本發明屬于免疫檢測技術領域，涉及一種豬口蹄疫病毒O型和A型抗體微孔板式化學發光檢測試劑盒。

背景技術

口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus，FMDV)引起的,發生于牛、羊、豬等偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。FMDV屬于小核糖核酸病毒科，口瘡病毒屬。根據病毒的血清學特性，目前已知全世界有7個主型：A、O、C、南非1、南非2、南非3和亞洲I型。同一血清型內又有若干個不同的亞型，各血清型之間幾乎沒有交叉免疫性，同一血清型內各亞型之間僅有部分交叉免疫性。

口蹄疫是亞洲、非洲和南美洲許多發展中地區偶蹄類動物最具傳染性和經濟破壞性的疾病之一，我國流行的口蹄疫以A型和O型為主，預防監測和免疫撲殺是我國目前防控口蹄疫的主要手段。我國動物免疫使用的主要為口蹄疫病毒O型-A型二價疫苗。OIE推薦的檢測口蹄疫抗體的標準方法為中和試驗，但中和試驗需要使用活病毒，需在特殊實驗室完成，且操作費時，酶聯免疫吸附分析法具有操作試驗操作簡便、檢測速度快的優點，因此得到廣泛應用。市場上已經有許多檢測單一抗體類型的商品化ELISA試劑盒，但這些ELISA方法常常不能滿足臨床檢測的需求，無法判定抗體類型，不利于確認可疑動物、無感染動物和免疫效力的評價。VP1抗體的產生時間和應答水平存在個體差異，有時在免疫或感染的豬機體內并不能檢測到VP1抗體或VP1抗體產生的時間延遲，所以，其結果會出現假陰性，準確性不高。對于那些已經免疫后又感染的動物，由于具有中和抗體使得病毒的復制很慢，導致體內具有很低濃度的特異性蛋白，但商品化的ELISA試劑盒敏感性低，使這些低濃度的特異性蛋白很難被檢測到，導致部分感染動物漏檢。因此，需要一種更敏感性、高效的檢測方法，對預防和控制口蹄疫的發生和流行將具有重要意義。

微孔板式化學發光免疫分析技術(CLIA)是在放射性免疫和酶聯免疫分析的基礎上逐漸發展建立的，具有試驗材料易獲取，對試驗環境、設備及人員的要求較低、試驗操作簡便、檢測速度快等優點。但是化學發光不需要不需要額外的光源或背景熒光，所有的能量都來自于樣本本身的化學反應，消除了背景影響，避免了外來因素(光源穩定性、光散射、光波選擇器)的干擾，可以在很寬的線性范圍內檢測極低濃度的分析物。同時光信號強度和待測物質的濃度呈線性關系，可以根據儀器的標定曲線，精確算出待測物的濃度。因此敏感性、特異性、穩定性和安全性上明顯優于放射性免疫和酶聯免疫分析方法。

目前市面上同時檢測和區分豬口蹄疫O型和A型抗體檢測的基于化學發光免疫分析方法制備的微孔板式試劑盒還沒有。本試劑盒為口蹄疫的診斷提供了更加靈敏、便捷、有效、快速的檢測方法，而且更適用于低濃度樣本的檢測以及疾病的早期診斷，對應預防和控制口蹄疫的發生和流行具有十分重要的意義。

發明內容

針對豬口蹄疫病毒檢測所面臨的問題，本發明擬提供一種豬口蹄疫病毒O型和A型抗體微孔板式化學發光檢測試劑盒，該試劑盒相對于市場上常用的試劑盒產品，敏感性更高，特異性更強，可以區分豬口蹄疫O型和A型抗體類型，診斷能力亦優于其他市售產品。

一種豬口蹄疫病毒O型和A型抗體微孔板式化學發光檢測試劑盒，所述檢測試劑盒包括化學發光包被板、酶標抗體、血清稀釋液、O型陽性對照血清、A型陽性對照血清、陰性對照血清、發光底物A、發光底物B和10倍濃縮洗滌液；

所述化學發光包被板為乳白色不透明聚苯乙烯96孔板，奇數列包被豬口蹄疫病毒O型VP1納米抗體蛋白，偶數列包被豬口蹄疫病毒A型VP1蛋白；