[發(fā)明專利]豬口蹄疫病毒O型和A型抗體微孔板式化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210527645.5
• 申請日: 2022-05-16
• 公開（公告）號: CN114705857B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王新杰;曾政;董春霞;駱璐;陳峰;白雪冬;孫曉明;費磊;陳匯鑫;張遠亮
• 申請（專利權(quán)）人: 北京億森寶生物科技有限公司;重慶市動物疫病預(yù)防控制中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58;G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務(wù)所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種豬口蹄疫病毒O型和A型抗體微孔板式化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，所述檢測試劑盒包含化學(xué)發(fā)光包被板、酶標抗體、血清稀釋液、O型陽性對照血清、A型陽性對照血清、陰性對照血清、發(fā)光底物A、發(fā)光底物B和10倍濃縮洗滌液，其特征在于：

所述化學(xué)發(fā)光包被板為乳白色不透明聚苯乙烯96孔板，奇數(shù)列包被豬口蹄疫病毒O型VP1納米抗體，偶數(shù)列包被豬口蹄疫病毒A型VP1納米抗體；

其中，豬口蹄疫病毒O型VP1納米抗體的氨基酸序列為：LQEWGAGLYSWALKPTSELSLTPGKGDQWGQGTLVTVLEWIYGSWIRQPGEIWNHDGFNPVASLKSQ FSLKSLSVTATAA DVYYCAEGRWEDSLRVTISVDTSNNSKNNSSASTKG；

豬口蹄疫病毒A型VP1納米抗體的氨基酸序列為：LQERRAVTLDGLQESGGTPGGAVCKALSLSGFIFSSYDMAWVRQAPSKGYVLEASISSGGSFTYYGAA VKGGRTIISRDGTNGQSTVRLQLNRAEDAGTFYCAKAADSDNLYAWSADNIDAWGHEVIVSSLDKG；所述包被過程為：將O型VP1納米抗體蛋白加入到pH＝9.6的碳酸鹽緩沖液中，使蛋白的濃度均為1ug/mL，以100uL/孔的加樣量將蛋白包被液加入到奇數(shù)列化學(xué)發(fā)光板中；將A型VP1納米抗體蛋白加入到pH＝9.6的碳酸鹽緩沖液中，使蛋白的濃度均為1ug/mL，以100uL/孔的加樣量將蛋白包被液加入到偶數(shù)列化學(xué)發(fā)光板中，2-8℃孵育16-18h；甩掉化學(xué)發(fā)光板中的蛋白包被液，向每孔中加入150uL/孔的5％BSA-PBST進行封閉，37℃封閉2h；甩掉化學(xué)發(fā)光板中的封閉液，25℃干燥2h，放入干燥劑，密封包裝，2-8℃保存；

所述O型陽性對照血清是經(jīng)疫苗免疫健康豬獲得的豬血清；

所述A型陽性對照血清是經(jīng)疫苗免疫健康豬獲得的豬血清；

所述陰性對照血清是未免疫過任何疫苗的健康豬血清；

所述酶標抗體為辣根過氧化物酶標記的羊抗豬IgG抗體。

2.如權(quán)利要求1所述的一種豬口蹄疫病毒O型和A型抗體微孔板式化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其中血清稀釋液為含5％v/v酪蛋白和0.5％v/v Tween-20的磷酸鹽緩沖液，pH＝7.4。

3.如權(quán)利要求1所述的一種豬口蹄疫病毒O型和A型抗體微孔板式化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其中發(fā)光底物A為含有0.1mmol/L的魯米諾和質(zhì)量體積分數(shù)為0.1％的羥基香豆素；溶劑為0.05mol/L、pH＝8.0的Tris緩沖液。

4.如權(quán)利要求1所述的一種豬口蹄疫病毒O型和A型抗體微孔板式化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其中發(fā)光底物B為含有0.07mmol/L的維生素C和3mmol/L氨基酸氧化酶，溶劑為0.05mol/L、pH＝5.2的醋酸銨溶液。

5.如權(quán)利要求1所述的一種豬口蹄疫病毒O型和A型抗體微孔板式化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其中10倍濃縮洗滌液為0.02mol/L的磷酸二氫鈉、0.08mol/L的磷酸氫二鈉、1.37mol/L的氯化鈉和0.5％v/vTween-20，pH＝7.4。

6.如權(quán)利要求1所述的一種豬口蹄疫病毒O型和A型抗體微孔板式化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其中檢測步驟如下：將待檢血清用血清稀釋液1：50倍稀釋，取100uL分別加入到化學(xué)發(fā)光包被板奇數(shù)列和偶數(shù)列中，同時在奇數(shù)列設(shè)置O型陽性對照血清和陰性對照血清作為對照，在偶數(shù)列設(shè)置A型陽性對照血清和陰性對照血清作為對照；將化學(xué)發(fā)光包被板于37℃反應(yīng)15min；用洗滌液洗滌5次，加入用5％BSA-PBST稀釋10000倍的辣根過氧化物酶標記的羊抗豬IgG抗體，37℃孵育15min；再經(jīng)洗滌液洗滌5次，加入發(fā)光底物A和發(fā)光底物B，15-25℃反應(yīng)5min，用化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測儀器檢測發(fā)光值。