[發(fā)明專利]一種基于適配體信號放大的化學發(fā)光檢測癌胚抗原試劑及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210525838.7
• 申請日: 2022-05-16
• 公開（公告）號: CN114624442B
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發(fā)明（設計）人: 唐雪瑩;先小龍
• 申請（專利權(quán)）人: 南京頤蘭貝生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 南京協(xié)行知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 32493
• 代理人: 蔣志棟

本發(fā)明公開了一種基于適配體信號放大的化學發(fā)光檢測癌胚抗原試劑，包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1為標記有適配體的磁珠懸浮液，所述試劑R2為標記有寡核苷酸鏈的吖啶酯溶液。將一個目標物對應一個吖啶酯的信號轉(zhuǎn)化成一個目標物對應N2個吖啶酯信號，達到了信號放大的效果，有效的改善了檢測靈敏。本發(fā)明還公開了一種基于適配體信號放大的化學發(fā)光檢測癌胚抗原試劑制備方法，適用于癌胚抗原的化學發(fā)光檢測試劑的制備。

技術(shù)領域

本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領域，具體涉及一種基于適配體信號放大的化學發(fā)光檢測癌胚抗原試劑及其制備方法。

背景技術(shù)

化學發(fā)光是一種公認的、用于腫瘤標志物和各種激素檢測的、最精確和最成熟的檢測方法。它的原理、技術(shù)與方法非常成熟，并被各大醫(yī)院用于腫瘤檢測和激素檢測。化學發(fā)光免疫分析(CLIA)將具有高靈敏度的化學發(fā)光測定技術(shù)與免疫反應相結(jié)合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術(shù)。常用于標記的物質(zhì)吖啶酯類化合物，是一種有效的發(fā)光標記物。吖啶酯作為標記物用于免疫分析, 它的化學反應簡單、快速、無須催化劑; 檢測小分子抗原通常采用競爭法, 大分子抗原則通常采用夾心法。但由于抗原抗體間反應的效率不同、特異性強弱差異，免疫反應的效果差異也較大，因此在篩選原料及后續(xù)的特異性、抗干擾研究中需要投入更多的人力、物力、財力。

適配體是由指數(shù)富集的配體系統(tǒng)篩選出的單鏈寡核苷酸，可以與相應的配體（如蛋白質(zhì)、細胞、小分子、金屬離子、核酸)結(jié)合。它的親和力高，特異性強。與抗原抗體相比，適配體具有溫度和pH穩(wěn)定性、低分子量低、成本低、易于修飾等優(yōu)點。尤其是它的溫度、pH穩(wěn)定性與核酸不易與其他蛋白質(zhì)結(jié)合的特點使它在檢測過程中受到的干擾更少，結(jié)果也更為準確。它們已逐漸被用于比色法、熒光、電化學法檢測生物標志物，但幾乎沒有應用于化學發(fā)光法檢測。

化學發(fā)光體系中較為常用的一個信號放大系統(tǒng)是生物素-鏈霉親和素體系，它的放大原理是：鏈霉親和素與四個標記了信號分子的生物素相連，富集信號分子，使信號放大。但它的效果是線性放大，并不如PCR等技術(shù)的指數(shù)級擴展。以PCR技術(shù)為代表的核酸擴展手段也是一種有效的信號放大手段，但它主要針對核酸類的檢測，并且檢測時間較長、檢測操作復雜、需要較為昂貴的擴增儀和原料、結(jié)果可能出現(xiàn)假陰性假陽性，因此也存在一定的局限性。

除了PCR技術(shù)之外，也有一些通過形成更多堿基對而產(chǎn)生自由能變化的DNA雜交反應，如催化發(fā)夾組裝（CHA）等。這類反應按照冪函數(shù)級別進行擴增，它的操作更簡單、擴展過程不需要儀器，但需要設計一些發(fā)夾結(jié)構(gòu)去實現(xiàn)反應，而在這些反應的過程中如果出現(xiàn)了亞穩(wěn)態(tài)的發(fā)夾結(jié)構(gòu)就會導致假陽性、背景信號高或反應速度慢等結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種基于適配體信號放大的化學發(fā)光檢測癌胚抗原試劑及其制備方法，旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中生物素-鏈霉親和素體系的放大效果不如PCR等技術(shù)的指數(shù)級擴展以及免疫反應中普遍存在的干擾反應；PCR技術(shù)檢測結(jié)果準確度較低；亞穩(wěn)態(tài)的發(fā)夾結(jié)構(gòu)檢測結(jié)果不準確、背景信號高或反應速度慢的問題。

本發(fā)明采取以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種基于適配體信號放大的化學發(fā)光檢測癌胚抗原試劑，包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1為標記有磁性顆粒標記鏈的磁性顆粒，所述試劑R2為標記有吖啶酯標記鏈的吖啶酯溶液，所述磁性顆粒標記鏈包括中間體一和中間體二，所述中間體一由寡核苷酸鏈C和搖擺寡核苷酸鏈T部分雜交形成，所述中間體二由寡核苷酸鏈S1、寡核苷酸鏈S2、寡核苷酸鏈S3雜交形成，所述吖啶酯標記鏈采用寡核苷酸鏈F，所述寡核苷酸鏈C的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述搖擺核苷酸鏈T的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，其5’端氨基修飾，所述寡核苷酸鏈S1的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示,其3’端氨基修飾，所述寡核苷酸鏈S2的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示，所述寡核苷酸鏈S3的核苷酸序列如SEQIDNo.5所示，所述寡核苷酸鏈F的核苷酸序列如SEQIDNo.6所示，其3’端氨基修飾。