[發明專利]一種基于適配體信號放大的化學發光檢測癌胚抗原試劑及其制備方法

有效

• 申請號: 202210525838.7
• 申請日: 2022-05-16
• 公開（公告）號: CN114624442B
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 唐雪瑩;先小龍
• 申請（專利權）人: 南京頤蘭貝生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 南京協行知識產權代理事務所(普通合伙) 32493
• 代理人: 蔣志棟

1.一種基于適配體信號放大的化學發光檢測癌胚抗原試劑，其特征在于, 包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1為標記有磁性顆粒標記鏈的磁珠懸浮液，所述試劑R2為標記有吖啶酯標記鏈的吖啶酯溶液，所述磁性顆粒標記鏈包括中間體一和中間體二，所述中間體一由寡核苷酸鏈C和搖擺寡核苷酸鏈T部分雜交形成，所述中間體二由寡核苷酸鏈S1、寡核苷酸鏈S2、寡核苷酸鏈S3雜交形成，所述吖啶酯標記鏈采用寡核苷酸鏈F，所述寡核苷酸鏈C的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述搖擺寡核苷酸鏈T的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，其5’端氨基修飾，所述寡核苷酸鏈S1的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示,其3’端氨基修飾，所述寡核苷酸鏈S2的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示，所述寡核苷酸鏈S3的核苷酸序列如SEQIDNo.5所示，所述寡核苷酸鏈F的核苷酸序列如SEQIDNo.6所示，其3’端氨基修飾；

其中，寡核苷酸鏈C的核苷酸序列SEQIDNo.1為：

5’-cataccagcttattcaattca-3’，

其中，搖擺寡核苷酸鏈T的核苷酸序列SEQIDNo.2為：

5’-ttttttttttttttttttttttttttttttcattcaataataagct-3’，

其中，寡核苷酸鏈S1的核苷酸序列SEQIDNo.3為：

5’-cataccagcttattattgaatgagggccgtaagttagttggagacgtaggttttt-3’，

其中，寡核苷酸鏈S2的核苷酸序列SEQIDNo.4為：

5’-ctttcctacacctacgtctccaactaacttacgg-3’，

其中，寡核苷酸鏈S3的核苷酸序列SEQIDNo.5為：

5’-ccacatacatcatattccctcattcaataataagct-3’，

其中，寡核苷酸鏈F的核苷酸序列SEQIDNo.6為：

5’-cctacgtctccaactaacttacggccctcattcaataataagctttttt-3’。

2.根據權利要求1所述一種基于適配體信號放大的化學發光檢測癌胚抗原試劑制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

取羧基化的磁珠于MES溶液中清洗，得到磁性顆粒；

將磁性顆粒重懸于活化反應液中，清洗稀釋后得到磁珠活化懸浮液；

取磁性顆粒標記鏈至磁珠活化懸浮液中旋轉混合反應，并添加封閉液，利用PBS溶液清洗后溶于稀釋液，得到磁珠包被原液；

利用稀釋液對磁珠包被原液進行稀釋，得到所述試劑R1；

取寡核苷酸鏈F于試管中，依次加入hepes溶液和吖啶酯溶液混合反應，得到混合液；

添加賴氨酸溶液至混合液中，反應得到標記母液；

添加PBS溶液至標記母液中混合反應，收集提純液體得到提純標記母液；

依次添加BSA溶液和防腐液至提純標記母液中，得到標記原液；

將標記原液使用稀釋液稀釋，得到試劑R2。

3.根據權利要求2所述的一種基于適配體信號放大的化學發光檢測癌胚抗原試劑制備方法，其特征在于：所述活化反應液包括MES溶液、EDC溶液和NHS溶液。

4.根據權利要求2所述的一種基于適配體信號放大的化學發光檢測癌胚抗原試劑制備方法，其特征在于：所述封閉液包括BSA混合液和甘氨酸溶液。

5.根據權利要求2所述的一種基于適配體信號放大的化學發光檢測癌胚抗原試劑制備方法，其特征在于：所述稀釋液采用PBS和BSA形成的混合溶液。

6.根據權利要求2所述的一種基于適配體信號放大的化學發光檢測癌胚抗原試劑制備方法，其特征在于，所述磁性顆粒標記鏈的制備過程具體如下：

取寡核苷酸鏈C和搖擺寡核苷酸鏈T混合于離心管中；

設定溫度水浴加熱至設定時間，得到中間體一；

取寡核苷酸鏈S1、寡核苷酸鏈S2、寡核苷酸鏈S3混合于離心管中；

設定溫度水浴加熱至設定時間，得到中間體二。