[發明專利]D-賴氨酸衍生物構筑的細菌細胞壁新生肽聚糖的生物發光檢測體系及應用方法

在審

• 申請號: 202210525034.7
• 申請日: 2022-05-14
• 公開（公告）號: CN115372341A
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 孫金玉;宋英壯;徐芷靜
• 申請（專利權）人: 西北工業大學深圳研究院
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;C12Q1/04;C07C247/18;C07F9/6541;C09K11/06
• 代理公司: 西安凱多思知識產權代理事務所(普通合伙) 61290
• 代理人: 王鮮凱

1.一種D-賴氨酸衍生物構筑的細菌細胞壁新生肽聚糖的生物發光檢測體系，其特征在于：體系包括D-熒光素衍生物和D-賴氨酸衍生物的混合物。

2.根據權利要求1所述的D-賴氨酸衍生物構筑的細菌細胞壁新生肽聚糖的生物發光檢測體系，其特征在于：所述D-熒光素衍生物和D-賴氨酸衍生物的比例范圍為1:1～20。

3.一種權利要求1所述體系中的D-賴氨酸衍生物，其特征在于結構式為：

4.一種權利要求3所述D-賴氨酸衍生物的制備方法，其特征在于步驟如下：

步驟1：將4-疊氮基-2,3,5,6-四氟苯甲酸置于二氯甲烷中，室溫下逐滴滴加草酰氯，加入催化量的DMF，室溫攪拌1～12h，蒸干得到粗品4-疊氮-2,3,5,6-四氟苯甲酰；

所述4-疊氮基-2,3,5,6-四氟苯甲酸與草酰氯摩爾比1:2；

步驟2：將粗品4-疊氮-2,3,5,6-四氟苯甲酰氯溶解于干燥的四氫呋喃中，并將其滴加至到N-(叔丁氧羰基)-D-賴氨酸、碳酸氫鉀水溶液中；室溫攪拌過夜，濃縮以去除四氫呋喃；

所述4-疊氮基-2,3,5,6-四氟苯甲酸與N-(叔丁氧羰基)-D-賴氨酸摩爾比1:2，4-疊氮基-2,3,5,6-四氟苯甲酸與碳酸氫鉀摩爾比1:2-5；

步驟3：柱層析分離步驟2得到的中間體，將其溶于少量乙酸乙酯中，加入飽和氯化氫乙酸乙酯溶液脫Boc，此時有白色固體析出，過濾收集白色固體得到D-賴氨酸衍生物DAz。

5.一種權利要求1所述體系中的D-熒光素衍生物，其特征在于：所述D-熒光素衍生物結構式為：

6.一種權利要求5所述D-熒光素衍生物的制備方法，其特征在于步驟如下：

步驟1)：將2-二苯基膦苯甲酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和4-二甲氨基吡啶的混合物溶解在干燥的二氯甲烷中，室溫下攪拌30分鐘；將化合物2-氰基-6-羥基苯并噻唑加入反應液中，室溫攪拌0～12h；薄層色譜監測反應，柱層析分離得到中間體；

步驟2)：將中間化合物溶解于二氯甲烷/甲醇溶液中，加入溶于超純水/甲醇的D-半胱氨酸鹽酸鹽和碳酸鉀混合物溶液，室溫反應0～1h分鐘；加入鹽酸水溶液至pH值為2-3，將沉淀物過濾掉并用冰水沖洗，柱層析分離得到白色D-熒光素衍生物TL-PDC。

7.一種權利要求1所述D-賴氨酸衍生物構筑的細菌細胞壁新生肽聚糖的生物發光檢測體系的應用方法，其特征在于步驟如下：用于檢測細菌細胞壁中的新生肽聚糖，以及在小鼠體內對細菌進行生物發光檢測。