[發明專利]一種血液中Omega-3和Omega-6多不飽和游離脂肪酸的檢測方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202210523737.6
• 申請日: 2022-05-13
• 公開（公告）號: CN114965755A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 崔麗;劉明莉;許晶;趙福榮;張亞蓮;孫曉宇;曹云峰
• 申請（專利權）人: 大連潤生康泰醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 北京中和立達知識產權代理有限公司 11756
• 代理人: 楊磊

1.一種血液中Omega-3和Omega-6多不飽和游離脂肪酸的檢測試劑盒，其包括：水解液、中和液、提取液、復溶液和梯度洗脫溶液；其中，水解液為KOH乙醇-水混合溶液，其中KOH的濃度為0.3-0.8mol/L，乙醇和水的體積比為8-10：1；中和液為鹽酸、甲酸和/或乙酸水溶液；提取液為正己烷；復溶液為甲醇-乙腈混合溶液，甲醇和乙腈的體積比為1-2：1-2。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，所述試劑盒中不含有Omega-3和Omega-6多不飽和游離脂肪酸衍生化試劑。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，所述梯度洗脫溶液包括流動相A和流動相B，其中，流動相A為水溶液，其含1-3mmol/L乙酸銨以及0.005-0.01％(v/v)濃氨水；流動相B為乙腈-異丙醇溶液，其含1-3mmol/L乙酸銨以及0.005-0.01％(v/v)濃氨水。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，所述試劑盒還包括校準液、內標液和質控樣本。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，所述ω3多不飽和游離脂肪酸為α-亞麻酸(C18:3ω3)、(5,8,11,14,17)二十碳五烯酸(C20:5ω3)、(4,7,10,13,16,19)二十二碳六烯酸(C22:6ω3)、(7,10,13,16,19)二十二碳五烯酸(C22:5ω3)、(13,16,19)二十二碳三烯酸(C22:3ω3)；所述ω6多不飽和游離脂肪酸為γ-亞麻酸(C18:3ω6)、亞油酸(C18:2ω6)、花生四烯酸(C20:4ω6)、(8,11,14)二十碳三烯酸(C20:3ω6)、(11,14)二十碳二烯酸(C20:2ω6)、(4,7,10,13,16)二十二碳五烯酸(C22:5ω6)、(7,10,13,16)二十二碳四烯酸(C22:4ω6)、(13,16)二十二碳二烯酸(C22:2ω6)。

6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述校準液為用乙醇溶液配制的8個濃度的上述ω3和ω6多不飽和游離脂肪酸的混合溶液；其中，C18:3ω3、C22:6ω3、C18:3ω6和C20:3ω6濃度范圍為10-1000nmol/mL，C20:5ω3濃度范圍為8-800nmol/mL，C22:5ω3濃度范圍為5-500nmol/mL，C22:3ω3和C22:2ω6濃度范圍為0.5-50nmol/mL，C18:2ω6濃度范圍為60-6000nmol/mL，C20:4ω6濃度范圍為25-2500nmol/mL，C20:2ω6濃度范圍為2-200nmol/mL，C22:5ω6濃度范圍為2.5-250nmol/mL，C22:4ω6濃度范圍為1-100nmol/mL。

7.一種使用權利要求1-6任一項所述試劑盒檢測血液中ω3和ω6多不飽和游離脂肪酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)樣本預處理：向玻璃管中加入血液樣本和內標液，再加入水解液，渦旋混合，進行孵育；孵育結束后靜置冷卻至室溫，加入中和液，渦旋混合；再加入提取液，渦旋振蕩，靜置至液面明顯分層；取上清液于另一玻璃管中，氮氣吹干；加入復溶液，渦旋混合，將復溶液加入玻璃內襯管中，待分析；

2)液相色譜串聯質譜檢測分析：將步驟1)得到的復溶液采用液相色譜串聯質譜進行檢測分析，通過校準液建立的校準曲線計算血液樣本中ω3和ω6游離脂肪酸的濃度。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟1)中孵育溫度為70-100℃，孵育時間為10-50min。