[發明專利]一種血液中Omega-3和Omega-6多不飽和游離脂肪酸的檢測方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202210523737.6
• 申請日: 2022-05-13
• 公開（公告）號: CN114965755A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 崔麗;劉明莉;許晶;趙福榮;張亞蓮;孫曉宇;曹云峰
• 申請（專利權）人: 大連潤生康泰醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 北京中和立達知識產權代理有限公司 11756
• 代理人: 楊磊

本發明公開了一種血液中Omega?3(ω3)和Omega?6(ω6)多不飽和游離脂肪酸的檢測方法和試劑盒，包括水解液、中和液、提取液、復溶液和梯度洗脫溶液；其中，水解液為KOH乙醇?水混合溶液，其中KOH的濃度為0.3?0.8mol/L，乙醇和水的體積比為8?10：1；中和液為鹽酸、甲酸和/或乙酸水溶液；提取液為正己烷；復溶液為甲醇?乙腈混合溶液，甲醇和乙腈的體積比為1?2：1?2。采用本發明的試劑盒，預處理操作過程簡單快速，樣本使用量少，樣本處理干凈，高效液相色譜?串聯質譜檢測靈敏度高，選擇性好，定量準確，分析時間短，具有廣闊的科研及臨床應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術檢測領域，具體地說是一種血液中Omega-3和Omega-6多不飽和游離脂肪酸的檢測方法和試劑盒。

技術背景

游離脂肪酸(free fatty acids,FFAs)是指非酯化的脂肪酸或未脂化的脂肪酸。根據單雙鍵組成游離脂肪酸可分為飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸與多不飽和脂肪酸。FFAs代謝活性極高，極易受脂肪代謝、糖代謝及內分泌代謝的影響。隨著研究的深入和技術的不斷進步，FFAs與疾病的關系逐漸明晰，FFAs已被證實與心腦血管、呼吸、消化、內分泌、免疫等系統疾病的發生發展，以及腫瘤和創傷性應激等的能量代謝關系密切。同時，游離脂肪酸的代謝異常與胰島素抵抗、高胰島素血癥、高血壓、2型糖尿病等疾病的判斷有重要的作用。

多不飽和脂肪酸(FolyunsaturatedFA，PUFA)主要包括Omega-3(ω3)和Omega-6(ω6)PUFA，人體自身不能合成，是人類的必需脂肪酸。幾十年來，多不飽和脂肪酸對健康和疾病的影響一直備受關注，其生物學特性仍然是人們關注的焦點。因為它們被認為在心血管疾病(CVD)、癌癥、抑郁癥、胰島素抵抗(IR)和非酒精性脂肪肝(NAFLD)等疾病中起著重要作用。雖然ω3PUFA和ω6PUFA需要共同競爭相同代謝的酶，但是卻生產出功能不同的產物。尤其在對待炎癥方面，Omega-6 PUFA促進炎癥的發生，引起身體的“失火”；ω3PUFA則恰恰相反，緩解并抑制炎癥，從而預防重大疾病的發生。可見他們兩者的平衡是非常重要的。幾項前瞻性隊列研究和隨機對照試驗提供的證據表明，在攝入ω-6/ω-3多不飽和脂肪酸比例接近1/1的地區，人群的慢性病發病率低于主要攝入西方飲食的地區(其中n-6/n-3比例約為15/1)。許多國際機構建議，ω-6/ω-3的比例不應超過5/1。

盡管ω-3和ω-6多不飽和脂肪酸及其脂質介質之間的相互作用是復雜的，但這些多不飽和脂肪酸在人體內的含量被認為對預防和發生與飲食模式相關的慢性病非常關鍵。多不飽和脂肪酸的分析測定具有挑戰性，主要是因為它們的生物多樣性和物理化學相似性。目前使用的方法包括氣相色譜(GC)、氣相色譜-質譜(GC-MS)、氣相色譜-串聯質譜(GC-MS/MS)、液相色譜-質譜(LC-MS)、液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)和液相色譜-紫外(UV)-串聯質譜(LC-UV-MS/MS)。LC-MS/MS由于其高度的分析特異性和敏感性，是目前分析多不飽和脂肪酸最有力的技術之一。

目前國內外有關脂肪酸檢測的報道頗多，涉及食品、環境、醫療衛生和臨床應用等多個領域，檢測的樣本類型也多種多樣，包括食品、環境、保健品、血液等。但是不同領域、不同樣本類型所涉及的脂肪酸檢測的樣本前處理方法、儀器檢測方法各不相同，檢測意義和參考區間也大不相同，沒有可比性。