[發(fā)明專利]一種試劑組、試劑盒及利用其進行免疫檢測的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210521009.1 | 申請日： | 2022-05-12 |
| 公開（公告）號： | CN114965983A | 公開（公告）日： | 2022-08-30 |
| 發(fā)明（設計）人： | 王小慧;林巍靖 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海云澤生物科技有限公司;上海健耕醫(yī)藥科技股份有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/531 | 分類號： | G01N33/531;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543 |
| 代理公司： | 上海弼興律師事務所 31283 | 代理人： | 呂學辰;黃益澍 |
| 地址： | 201112 上海市閔行區(qū)新駿環(huán)路*** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 試劑 試劑盒 利用 進行 免疫 檢測 方法 | ||
1.一種膠乳增強免疫比濁法試劑的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
(1)大粒徑膠乳微球和小粒徑膠乳微球分別與活化緩沖液混勻后加入活化劑進行活化；
(2)將抗待測物的抗體加入活化后的大粒徑膠乳微球中，將待測樣本與蛋白制備成待測物蛋白復合物后加入活化后的小粒徑膠乳微球中，分別進行偶聯(lián)反應；
(3)向偶聯(lián)反應后的反應液中加入封閉液進行封閉，封閉后棄上清，固形物分別用緩沖液復溶并重懸，即得包含抗體偶聯(lián)的大粒徑膠乳微球的R1試劑，和，包含待測物偶聯(lián)的小粒徑膠乳微球的R2試劑；
其中，所述的膠乳微球為疏水微球，表面帶有負電荷的羧基；所述的大粒徑膠乳微球固體含量為5％-10％，粒徑為275-310nm；所述的小粒徑膠乳微球固體含量為5％-10％，粒徑為70-90nm。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的活化緩沖液為MES緩沖液；和/或，所述的活化劑為NHS和EDC；和/或，膠乳微球:NHS:EDC的總質(zhì)量比為7:10:1；和/或，所述活化的溫度為37℃，反應時間為30-60min；和/或，步驟(3)中，封閉后通過離心棄上清；
優(yōu)選地，所述膠乳微球為羧基聚苯乙烯膠乳微球；和/或，所述的大粒徑膠乳微球固體含量為10％，粒徑為275nm；和/或，所述的小粒徑膠乳微球固體含量為5％，粒徑為70nm；和/或，步驟(1)中，所述MES緩沖液的濃度為20mmol/L，pH值為6.1；和/或，步驟(3)中，所述的離心的轉(zhuǎn)速為16,000rpm，時間為40min。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的抗體為單克隆抗體或多克隆抗體中的任意一種；所述的待測物蛋白復合物為藥物與鑰孔血藍蛋白的復合物；和/或，所述偶聯(lián)反應的溫度為25℃，反應時間為10-90min；優(yōu)選地，所述的待測物為他克莫司、雷帕霉素或環(huán)孢霉素。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的抗體經(jīng)緩沖液稀釋后的濃度為0.5-5mg/mL，優(yōu)選1mg/mL；和/或，所述的待測物蛋白復合物經(jīng)緩沖液稀釋后的濃度為20-100μg/mL，優(yōu)選50μg/mL。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述的封閉液為牛血清白蛋白、甘氨酸或乙醇胺；和/或，所述封閉的溫度為37℃，時間為30-60min，優(yōu)選在震蕩的條件下封閉，例如120rpm。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，復溶抗體偶聯(lián)的大粒徑膠乳微球所用的緩沖液的成分包括：
-50-100mmol/L HEPES或Tris或PBS；優(yōu)選100mmol/L HEPES；
-1％NaCl；
-防腐劑：0.1％NaN3或Procline300或硫柳汞；優(yōu)選0.1％Procline300；
-保護劑：1-5％海藻糖和0.1-0.5％甘氨酸；優(yōu)選2％海藻糖和0.2％甘氨酸；
pH值為7.0-8.0；優(yōu)選pH值為7.4；和/或，
復溶待測物蛋白復合物偶聯(lián)的小粒徑膠乳微球所用的緩沖液的成分為：
-50-100mmol/L HEPES或Tri或PBS；優(yōu)選50mmol/L HEPES；
-3％PEG，分子量為6,000-20,000；優(yōu)選分子量為8,000；
-防腐劑：0.1％NaN3或Procline300或硫柳汞；優(yōu)選0.1％Procline300；
-保護劑：1％甘油和2％蔗糖；
pH值為6.5-8.5；優(yōu)選pH值為8.0。
7.一種用于膠乳增強免疫比濁法的試劑組，其特征在于，所述的試劑組包括通過如權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法制得的包含抗體偶聯(lián)的大粒徑膠乳微球的R1試劑，和，用于制備含待測物蛋白復合物偶聯(lián)的小粒徑膠乳微球的R2試劑的各組分。
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