[發明專利]一種殼聚糖結合域氨基酸序列的應用及釀酒酵母孢子固定化酶的方法

有效

• 申請號: 202210519240.7
• 申請日: 2022-05-12
• 公開（公告）號: CN114908115B
• 公開（公告）日: 2023-10-27
• 發明（設計）人: 李子杰;高曉冬;李婉杰;許向陽;宋在偉
• 申請（專利權）人: 江南大學;棗莊市杰諾生物酶有限公司
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N11/16;C12N11/18;C12N9/40;C12N9/24;C12R1/865
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 康偉

1.一種殼聚糖結合域氨基酸序列的應用，其特征在于：所述應用為利用所述殼聚糖結合域氨基酸序列在釀酒酵母孢子固定化酶中的應用，所述殼聚糖結合域氨基酸序列如SEQID NO.1所示。

2.如權利要求1所述的殼聚糖結合域氨基酸序列的應用，其特征在于：所述殼聚糖結合域氨基酸序列來源于Paenibacilus sp.IK-5殼聚糖酶的殼聚糖結合區域。

3.如權利要求1或2所述的殼聚糖結合域氨基酸序列的應用，其特征在于：所述在釀酒酵母孢子固定化酶中的應用，利用所述殼聚糖結合域氨基酸序列與釀酒酵母孢子壁殼聚糖層的親和能力，將目的酶與所述殼聚糖結合域氨基酸序列融合表達在釀酒酵母孢子中。

4.如權利要求3所述的殼聚糖結合域氨基酸序列的應用，其特征在于：所述釀酒酵母孢子為釀酒酵母缺陷型菌株dit1Δ的孢子。

5.一種釀酒酵母孢子固定化酶的方法，其特征在于：包括，

將目的酶基因構建在含有如權利要求1所述的殼聚糖結合域氨基酸序列的表達質粒中，得到重組質粒；

將重組質粒轉化到釀酒酵母缺陷型菌株dit1Δ中，得到酵母菌株；

對得到的酵母菌株利用二倍體酵母誘導產孢得到孢子固定化目的酶。

6.如權利要求5所述的釀酒酵母孢子固定化酶的方法，其特征在于：所述目的酶基因為α-半乳糖苷酶基因。

7.如權利要求5或6所述的釀酒酵母孢子固定化酶的方法，其特征在于：所述表達質粒為釀酒酵母質粒pRS426。

8.如權利要求7所述的釀酒酵母孢子固定化酶的方法，其特征在于：還包括對誘導產孢后的孢子進行純化的方法。

9.如權利要求8所述的釀酒酵母孢子固定化酶的方法，其特征在于：所述對誘導產孢后的孢子進行純化，鏡檢確定酵母菌株產孢情況，低溫離心收集孢子，使用滅菌水洗滌兩遍后重懸于原生質體緩沖液中，加入溶壁酶搖床處理；超聲破碎，鏡檢獲得游離的單個孢子；使用預冷的滅菌水清洗后獲得純化孢子，冷凍干燥，置于-20℃儲存。

10.如權利要求5、6、8、9中任一項所述的釀酒酵母孢子固定化酶的方法，其特征在于：所述利用二倍體酵母誘導產孢，挑取平板上的單克隆酵母菌株，接種到SD-Ura液體培養基中，30℃搖床培養15～20h；將菌液轉接至搖瓶中，30℃搖床培養24h；離心收集酵母菌體，用2％KAc重懸菌體，于30℃培養48h誘導產孢。