[發明專利]一種抗豬CD164L2單克隆抗體制備與應用

在審

• 申請號: 202210516764.0
• 申請日: 2022-05-12
• 公開（公告）號: CN114891107A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 李煥榮;續田麗;聶曉華;張立國
• 申請（專利權）人: 北京農學院
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/85;C07K16/06
• 代理公司: 深圳國聯專利代理事務所(特殊普通合伙) 44465
• 代理人: 鐘志蕓

本發明公開了一種抗豬CD164L2單克隆抗體制備，包括以下制備步驟：從NCBI基因庫中獲取查找豬源CD164L2的基因序列，合成pIRES2?CD164L2?EGFP質粒；進行質粒的擴增；以表示CD164L2蛋白的表達情況；在質粒轉染48小時后，CD164L2的L929細胞與CpG1826佐劑混合后，通過背部皮下多點注射免疫途徑免疫8周齡Balb/c小鼠，經過3次加強免疫后，收集血清獲得多克隆抗體，將多抗血清與表達CD164L2蛋白的人293T細胞做流式結合檢測；選擇結合程度最好的小鼠進行雜交瘤融合，4次流式檢測篩選，獲得單克隆抗體，不僅為深入研究CD164L2蛋白的分子機制奠定基礎，而且為研究豬DC5的亞群鑒定、發育和功能研究提供有效的抗體材料，及為抗體介導的靶向免疫細胞的疫苗研制提供新的設計思路，具有比較重要的科學價值。

技術領域

本發明涉及與豬CD164L2結合的抗體技術領域，具體是指一種抗豬CD164L2單克隆抗體制備與應用。

背景技術

樹突狀細胞是專職的抗原提呈細胞，是連接先天免疫和適應性免疫反應的橋梁，其具有異質性，不同的樹突狀細胞亞群具有不同的功能特性，在機體的免疫過程中發揮不同的功能，比如Ⅰ型樹突狀細胞誘導CD8+T細胞的增殖和活化，發揮細胞毒性的作用；Ⅱ型樹突狀細胞誘導CD4+T細胞的增殖和分化；漿細胞樣樹突狀細胞則在抗病毒的過程中產生大量的干擾素，從而抑制病毒的增殖。因此，對樹突狀細胞亞群的鑒定及功能的研究，首先是要對其進行分群鑒定，而可用的商品化豬抗體較少，因此我們前期的工作就是根據不同樹突狀細胞亞群的特征性表面分子的基因表達差異，制備大量的豬抗體，包括CD164L2。為后期不同樹突狀細胞亞群的鑒定，以及為后續靶向特定樹突狀細胞亞群，增強抗原提呈能力，進而機體的免疫力等功能研究提供抗體支持。本發明的抗豬CD164L2抗體主要是用于除此之外，在臨床醫學的研究中，可用于血液蛋白、血壓、脈沖壓力的檢測，可以用于單細胞計數，單細胞計數是高血壓、重度抑郁癥、炎癥、心血管疾病臨床研究的潛在標志物。

本發明是基于豬外周血樹突狀細胞的單細胞數據的結果分析，發現CD164L2在某個樹突狀細胞亞群上特異性高表達，而在其它樹突狀細胞亞群上低表達或不表達，因此我們實驗室對CD164L2的抗體進行了制備。CD164L2是CD164的主要類似物，屬于Ⅰ型跨膜蛋白。已經在mRNA水平上檢測了CD164L2在各種豬組織中的表達，報道了CD164L2在皮下脂肪組織(subcutaneous adipose)、卵巢、肺臟中高表達，在脾臟中低表達，在心臟、腎臟、肝臟等組織中幾乎不表達(Li,Chen etal.2017)。

在人的樹突狀細胞研究中，發現這群細胞在受到CpGA刺激時，分泌干擾素的水平介于經典樹突狀細胞和漿細胞樣樹突狀細胞；在CpGB的刺激下，DC5產生炎性細胞因子的水平更高；以及活化T最強，且能誘導Th22細胞反應(Yu,Zhang et al.2015)。我們目前認為在豬外周血中新發現的這群細胞是人和小鼠DC5樹突狀細胞的同源物。CD164L2主要在新發現的這群豬樹突狀細胞亞群中高表達。已經有研究證明，疫苗靶向表達XCR1分子和MHCⅡ分子的樹突狀細胞(Fredriksen,Sandlie et al.2006,Bernelin-Cottet,Urien etal.2019)，能夠顯著提高疫苗效應，增強動物機體的免疫力。此CD164L2單抗的制備可以為之后的靶向疫苗的研究提供前期的支持。

目前關于樹突狀細胞的研究主要集中在人和小鼠的研究，對于動物，比如豬、牛、羊、禽類等，研究都比較少，還處于起步階段，其根本原因在于抗體的研發較少，幾乎沒有，因此制備可使用的抗體成了未來研究的重中之重。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服以上技術缺陷，提供一種抗豬CD164L2單克隆抗體制備與應用，提供一個可結合豬CD164L2的單克隆抗體，不僅為深入研究CD164L2蛋白的分子機制奠定基礎，而且為研究豬DC5的亞群鑒定、發育和功能研究提供有效的抗體材料，及為抗體介導的靶向免疫細胞的疫苗研制提供新的設計思路，具有比較重要的科學價值。