[發(fā)明專利]一種抗豬CD164L2單克隆抗體制備與應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210516764.0
• 申請(qǐng)日: 2022-05-12
• 公開（公告）號(hào): CN114891107A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李煥榮;續(xù)田麗;聶曉華;張立國(guó)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京農(nóng)學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C12N15/85;C07K16/06
• 代理公司: 深圳國(guó)聯(lián)專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 44465
• 代理人: 鐘志蕓

1.一種抗豬CD164L2單克隆抗體制備，其特征在于：包括以下制備步驟：

步驟一：從NCBI基因庫(kù)中獲取查找豬源CD164L2的基因序列，合成pIRES2-CD164L2-EGFP質(zhì)粒；

步驟二：在CD164L2蛋白C端加入了flag蛋白序列，以表征CD164L2蛋白的表達(dá)，構(gòu)建了既可以檢測(cè)GFP也檢測(cè)flag的pIRES2-CD164L2-flag-EGFP質(zhì)粒，將構(gòu)建的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到TOP10感受態(tài)中，進(jìn)行質(zhì)粒的擴(kuò)增；

步驟三：將質(zhì)粒通過(guò)lipo2000轉(zhuǎn)染到小鼠的L929細(xì)胞中，在真核細(xì)胞中進(jìn)行蛋白的表達(dá)，通過(guò)檢測(cè)GFP的指標(biāo)，以表示CD164L2蛋白的表達(dá)情況；

步驟四：在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，將表達(dá)CD164L2的L929細(xì)胞與CpG1826佐劑混合后，通過(guò)背部皮下多點(diǎn)注射免疫途徑免疫8周齡Balb/c小鼠，經(jīng)過(guò)3次加強(qiáng)免疫后，收集血清獲得多克隆抗體，將多抗血清與表達(dá)CD164L2蛋白的人293T細(xì)胞做流式結(jié)合檢測(cè)；

步驟五：選擇結(jié)合程度最好的小鼠進(jìn)行雜交瘤融合，通過(guò)4次流式檢測(cè)篩選，獲得單克隆抗體。

2.一種如權(quán)利要求1所述抗豬CD164L2單克隆抗體的應(yīng)用。