[發(fā)明專利]靈芝多糖的發(fā)酵提取方法、靈芝多糖組合物及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210506935.1
• 申請(qǐng)日: 2022-05-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114672527A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳建新;黃慶;柴娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P19/04
• 分類號(hào): C12P19/04;A61K8/73;A61Q19/08;A61Q19/00;C12R1/125;C12R1/865;C12R1/25
• 代理公司: 南京正聯(lián)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32243
• 代理人: 姜夢(mèng)翔

本發(fā)明公開(kāi)了靈芝多糖的發(fā)酵提取方法、靈芝多糖組合物及其應(yīng)用，本發(fā)明所述的靈芝多糖的發(fā)酵提取方法，首先利用枯草芽孢桿菌進(jìn)行發(fā)酵，枯草芽孢桿菌能產(chǎn)生多種纖維素酶和蛋白酶，從而促進(jìn)子實(shí)體的細(xì)胞壁快速瓦解，快速釋放細(xì)胞壁上以及胞內(nèi)的包含靈芝多糖在內(nèi)的大量胞內(nèi)活性成分；然后，將枯草芽孢桿菌發(fā)酵剩余的殘?jiān)M(jìn)行再利用，具體采用釀酒酵母菌將殘?jiān)形唇到獾拇蠓肿佣嗵沁M(jìn)行降解，對(duì)殘?jiān)M(jìn)行二次利用且轉(zhuǎn)化出更多種類的小分子靈芝多糖；最后，將釀酒酵母菌發(fā)酵剩余的二次殘?jiān)M(jìn)行最后的發(fā)酵利用，具體采用乳酸菌屬的菌株將二次殘?jiān)械奈唇到獬煞诌M(jìn)行發(fā)酵，可產(chǎn)乳酸，且有提高發(fā)酵產(chǎn)物保濕嫩膚功效的作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及及天然藥物化學(xué)領(lǐng)域和化妝品領(lǐng)域，特別是涉及靈芝多糖的發(fā)酵提取方法、靈芝多糖組合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

靈芝是從孢子萌發(fā)，經(jīng)過(guò)單核的初級(jí)菌絲至雙核的次級(jí)菌絲和三級(jí)菌絲繼而形成子實(shí)體。靈芝孢子內(nèi)含有豐富的多糖肽、腺嘌呤核苷、蛋白質(zhì)、酶、三萜類、有機(jī)鍺、微量元素等特殊成分。靈芝菌絲體的化學(xué)成分主要是蛋白質(zhì)、核酸、碳水化合物、脂類及各種無(wú)機(jī)鹽類。靈芝子實(shí)體包含孢子和菌絲體的所有的營(yíng)養(yǎng)成分，營(yíng)養(yǎng)成分豐富，且比市售孢子粉價(jià)格低，經(jīng)濟(jì)效益高，極具有研究?jī)r(jià)值。

靈芝多糖是靈芝的主要活性成分之一，國(guó)內(nèi)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)的靈芝多糖有200多種，主要以雜多糖形式存在，其中絕大多數(shù)是β-葡聚糖，天然的β-葡聚糖被認(rèn)為是一種功能性多糖，有抗氧化、抗皺、抗紫外線和保濕等活性，經(jīng)常用于化妝品中。但靈芝細(xì)胞壁非常堅(jiān)硬，會(huì)限制靈芝多糖的充分溶出。靈芝細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)可分為四層，由外到內(nèi)依次是β-葡聚糖、糖蛋白、蛋白質(zhì)、幾丁質(zhì)微絲等，借助有效手段破壁，可助于靈芝多糖的溶出。

目前靈芝多糖的提取方法有熱水浸提法、微波輔助提取法、酶解法、超聲提取等方法，但普遍存在雜質(zhì)含量高，操作麻煩，易破壞提取物活性影響藥效發(fā)揮且損耗較大、破壁不完全導(dǎo)致提取量有限等局限性。

微生物轉(zhuǎn)化對(duì)生物活性物質(zhì)的提取作用更溫和，能夠最大程度保留被提取物中的天然活性成分，降低毒副作用，同時(shí)微生物在代謝過(guò)程中產(chǎn)生的多種活性酶達(dá)到增效的作用，因此采用微生物發(fā)酵技術(shù)提取靈芝多糖，具有原料利用率高和技術(shù)溫和等優(yōu)點(diǎn)，已成為植物來(lái)源的化妝品原料研發(fā)熱點(diǎn)，但是現(xiàn)有技術(shù)中公開(kāi)的微生物發(fā)酵技術(shù)多運(yùn)用單一菌種發(fā)酵，其中，單一菌種發(fā)酵代謝產(chǎn)物不夠豐富、原料利用率不高。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：本發(fā)明提供了一種靈芝多糖的發(fā)酵提取方法和靈芝多糖組合物及其應(yīng)用，本發(fā)明采用逐級(jí)發(fā)酵的方式對(duì)靈芝子實(shí)體進(jìn)行處理，選用枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和植物乳酸桿菌三種益生菌，首先利用枯草芽孢桿菌產(chǎn)酶特性充分瓦解細(xì)胞壁，其次利用釀酒酵母菌降解大分子多糖，最后利用植物乳酸桿菌產(chǎn)酸的特性提高生物活性，每一步發(fā)酵條件易于控制和調(diào)節(jié)，且對(duì)底物順序發(fā)酵多次，有助于獲取更多的小分子多糖。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

第一方面，本發(fā)明提供了一種靈芝多糖的發(fā)酵提取方法，圖1a所示，所述提取方法由包括以下步驟的方法制得：

①將發(fā)酵底物加10～20倍重量的無(wú)菌水，混合均勻，作為半固體發(fā)酵培養(yǎng)基，所述發(fā)酵底物可以為靈芝子實(shí)體初步研磨或機(jī)械破壁形成的絮狀粗粉、也可以是靈芝原料包括靈芝子絮狀粗粉或孢子粉進(jìn)一步破壁處理后形成的粘稠絮狀物；

②進(jìn)行一次發(fā)酵純化處理，所述一次發(fā)酵純化處理過(guò)程包括：將活化后的枯草芽孢桿菌按接種至半固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在空氣通風(fēng)條件下，30℃～37℃溫度下恒溫?fù)u瓶發(fā)酵12～72h，抽濾獲取濾液，濾液離心取上清液，上清液去蒸發(fā)濃縮凍干保存記為一次發(fā)酵靈芝粗提取物，培養(yǎng)基中的剩余藥渣高壓蒸汽滅菌終止發(fā)酵；對(duì)一次發(fā)酵靈芝粗提取物進(jìn)行純化處理，獲得一次發(fā)酵純化多糖組合物；