[發(fā)明專利]HIV-1 p24 ELISA檢測(cè)試劑盒及其使用方法與應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210505608.4
• 申請(qǐng)日: 2022-05-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115877013A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉麗美;李查;張?zhí)鞊P(yáng);凡鵬程;鄭孟韜;蔡宇卿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇譜新生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及IPCG01N33領(lǐng)域，更具體地，涉及一種HIV?1p24ELISA檢測(cè)試劑盒及其使用方法和應(yīng)用。采用雙抗夾心法檢測(cè)樣本中HIV?1p24蛋白，使用雙抗體包被酶聯(lián)板，以生物素標(biāo)定的p24抗體為檢測(cè)抗體完成了試劑盒開(kāi)發(fā)。不需提前一天進(jìn)行板子包被，減少操作者的工作量，節(jié)約整個(gè)操作時(shí)間。試劑盒的定量范圍為6.25?200pg/mL,LOD≤3.125pg/mL，經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，本試劑盒的檢測(cè)方法靈敏度高，具有良好的精密度和準(zhǔn)確度，可用于檢測(cè)病毒樣品中p24蛋白的含量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及IPCG01N33領(lǐng)域，更具體地，涉及一種HIV-1p24 ELISA檢測(cè)試劑盒及其使用方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

p24是HIV病毒顆粒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，是結(jié)構(gòu)基因gag的產(chǎn)物，在病毒的包裝和成熟過(guò)程中起重要作用。p24蛋白的氨基酸序列在HIV各類型質(zhì)檢中高度保守，缺失p24會(huì)導(dǎo)致病毒無(wú)法正常組裝。

慢病毒載體是在HIV-1病毒基礎(chǔ)上改造而生成的病毒載體系統(tǒng)，慢病毒可高效地將目的基因轉(zhuǎn)入相關(guān)細(xì)胞中。p24蛋白的含量代表著慢病毒的顆粒數(shù)。免疫分析法(ELISA)是行業(yè)內(nèi)檢測(cè)慢病毒物理滴度(p24蛋白)的首選方法。

常規(guī)的ELISA實(shí)驗(yàn)操作需要提前一天進(jìn)行板子包被，以及其他檢驗(yàn)試劑的配制，時(shí)間周期長(zhǎng)，且提前準(zhǔn)備工作復(fù)雜，工作量大。且ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)受環(huán)境、人員操作影響較大，常規(guī)操作，整個(gè)物料準(zhǔn)備、檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜，且出錯(cuò)率高，常常會(huì)因?yàn)闃悠窋?shù)量大而出現(xiàn)樣品與樣品之間混淆，加樣時(shí)孔與孔之間重復(fù)或者跳孔等。該試劑盒的目的在于提供一款ELISA檢測(cè)測(cè)定試劑盒，里面已包含包被好的板子，配置好的試劑。可改善現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)檢測(cè)操作中存在的復(fù)雜操作，出錯(cuò)率高等不足，解決前期準(zhǔn)備工作繁瑣的技術(shù)問(wèn)題，便于實(shí)驗(yàn)的順利開(kāi)展，得到更可靠、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明第一方面，提供了一種HIV-1 p24ELISA檢測(cè)試劑盒，包括：包被酶標(biāo)板、檢測(cè)抗體、酶結(jié)合物、標(biāo)準(zhǔn)品、裂解液、檢測(cè)抗體和酶結(jié)合物稀釋液、樣品稀釋液、20×PBST洗液、底物顯色液A、底物顯色液B、終止液。

優(yōu)選的，所述包被酶標(biāo)板由HIV-1p24特異性單克隆抗體包被。

優(yōu)選的，所述HIV-1p24特異性單克隆抗體由P-AB-1和P-AB-2兩種抗體組成。

優(yōu)選的，所述P-AB-1和P-AB-2的濃度比為(1-2)：(1-2)；進(jìn)一步優(yōu)選的，為1:1。

申請(qǐng)人意外發(fā)現(xiàn)，選用濃度比為(1-2)：(1-2)的P-AB-1和P-AB-2兩種抗體組成的HIV-1p24特異性單克隆抗體應(yīng)用于包被酶標(biāo)板中，不僅可以減少試劑盒的檢測(cè)時(shí)間，還能提高試劑盒的精密度。這可能是由于傳統(tǒng)的雙抗夾心法檢測(cè)樣本中HIV-1p24蛋白，只采用一種HIV-1p24特異性單克隆抗體預(yù)包被，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，且精密度低。申請(qǐng)人意外發(fā)現(xiàn)選用(1-2)：(1-2)的P-AB-1和P-AB-2兩種抗體組成的HIV-1p24特異性單克隆抗體應(yīng)用于包被酶標(biāo)板中，不僅提高了其特異性，使得其精密度更高，而且兩種抗體協(xié)同作用，加快了反應(yīng)速度，從而減少了試劑盒的檢測(cè)時(shí)間，但是其會(huì)使得背景太高，影響特異性染色顏色的呈現(xiàn)。

在一些優(yōu)選的方案中，所述P-AB-1和P-AB-2可為市售，例如供應(yīng)商abcam公司的ab32352和ab63958。

優(yōu)選的，所述包被酶標(biāo)板的制備方法為：使用包被緩沖液將HIV-1p24特異性單克隆抗體稀釋后得混合包被，每孔加入100μL混合包被4℃過(guò)夜；倒掉各孔內(nèi)液體，用清洗液(350μL/孔)清洗微孔3次之后，每孔中加入200μL封閉液，37℃溫箱放置1.5h；倒掉各孔內(nèi)液體，用清洗液微孔3次之后，在面巾紙上拍干；每孔中加入200μL保存劑，37℃反應(yīng)1h后，倒掉各孔內(nèi)液體，在面巾紙上拍干并干燥，即得。