[發明專利]HIV-1 p24 ELISA檢測試劑盒及其使用方法與應用

在審

• 申請號: 202210505608.4
• 申請日: 2022-05-10
• 公開（公告）號: CN115877013A
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 劉麗美;李查;張天揚;凡鵬程;鄭孟韜;蔡宇卿
• 申請（專利權）人: 江蘇譜新生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543
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• 代理人: 暫無信息

1.一種HIV-1p24ELISA檢測試劑盒，其特征在于，包括：包被酶標板、檢測抗體、酶結合物、標準品、裂解液、檢測抗體和酶結合物稀釋液、樣品稀釋液、20×PBST洗液、底物顯色液A、底物顯色液B、終止液；

所述包被酶標板由HIV-1p24特異性單克隆抗體包被；

所述檢測抗體為生物素標定的p24抗體；

所述酶結合物為辣根過氧化物酶HRP標記鏈霉親和素；

所述標準品為含HIV-1p24抗原的人血清；

所述裂解液為0.1％SDS、0.1vol％Triton中的一種或多種；

所述檢測抗體和酶結合物稀釋液為20vol％CSBuffer和3％BSA-PBS中的一種或多種。

2.根據權利要求1所述的一種HIV-1p24 ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述HIV-1p24特異性單克隆抗體由P-AB-1和P-AB-2兩種抗體組成。

3.根據權利要求1或2所述的一種HIV-1p24 ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述包被酶標板的制備方法為：使用包被緩沖液將HIV-1p24特異性單克隆抗體稀釋后得混合包被，每孔加入100μL混合包被4℃過夜；倒掉各孔內液體，用清洗液清洗微孔3次之后，每孔中加入200μL封閉液，37℃溫箱放置1.5h；倒掉各孔內液體，用清洗液微孔3次之后，在面巾紙上拍干；每孔中加入200μL保存劑，37℃反應1h后，倒掉各孔內液體，在面巾紙上拍干并干燥，即得。

4.根據權利要求3所述的一種HIV-1p24 ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述包被緩沖液與抗體的濃度比為1:(2000-4000)。

5.根據權利要求3或4所述的一種HIV-1p24 ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述清洗液的制備方法為：取適量20×PBST洗液用去離子水1：20稀釋后即得。

6.一種根據權利要求1-5任一項所述的HIV-1p24 ELISA檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，步驟如下：

S1、在包被酶標板上，每孔加入10μL裂解液，再加入90μL用樣品稀釋液稀釋的標準品至相應孔中，用封板膜封板后置37℃恒溫震蕩培養箱，震蕩速度為200-300rpm，反應時間為1h；

S2、倒掉各孔內液體，用清洗液清洗微孔3次之后，在面巾紙上拍干；

S3、每孔加入100μL用20vol％CSBuffer稀釋的檢測抗體，用封板膜封板后置37℃恒溫震蕩培養箱，震蕩速度為200-300rpm，反應時間為1h；

S4、倒掉各孔內液體，用清洗液清洗微孔3次之后，在面巾紙上拍干；

S5、每孔加入100μL用20vol％CSBuffer稀釋的酶結合物，用封板膜封板后置37℃恒溫震蕩培養箱，震蕩速度為200-300rpm，反應時間為1h；

S6、倒掉各孔內液體，用清洗液清洗微孔3次之后，在面巾紙上拍干；

S7、將底物顯色液A和底物顯色液B混合制得底物顯色液，每孔加入100μL底物顯色液，用封板膜封板后在25℃下顯色10min；

S8、每孔加入50μL終止液，用酶標儀讀值。

7.根據權利要求6所述的一種HIV-1p24 ELISA檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，步驟S1所述的標準品稀釋后的濃度為6.25-200pg/mL。

8.根據權利要求7所述的一種HIV-1p24 ELISA檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，步驟S3所述檢測抗體與20vol％CSBuffer的濃度比為1：2000。

9.根據權利要求6-8任一項所述的一種HIV-1p24 ELISA檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，步驟S5中所述酶結合物與20vol％CSBuffer的濃度比為1：10000。

10.一種根據權利要求1-5任一項所述的HIV-1p24 ELISA檢測試劑盒的應用。