[發(fā)明專(zhuān)利]一種穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SRSF3的RAW 264.7細(xì)胞系、其制備方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210503386.2
• 申請(qǐng)日: 2022-05-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115927190A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李雅林;毛雙雙;劉凱;李明亮;何浩;劉有旺;康莉;封勇;王琪
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東第一醫(yī)科大學(xué)（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院）
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/10;C12N15/867;C12N15/12;A61K35/15;A61K38/17;A61P29/00;A61P35/00
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 呂薇

1.一種穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SRSF3的RAW?264.7細(xì)胞系，其特征在于，具有慢病毒載體，SRSF3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SRSF3的RAW?264.7細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、構(gòu)建過(guò)表達(dá)SRSF3的Lenti-Flag-hyg-SRSF3質(zhì)粒；

步驟二、將步驟一構(gòu)建的Lenti-Flag-hyg-SRSF3質(zhì)粒與psPAX2和pMD2.G包裝載體構(gòu)成三質(zhì)粒表達(dá)系統(tǒng)，共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，收集慢病毒并濃縮；

步驟三、以步驟二收集并濃縮的慢病毒轉(zhuǎn)染RAW?264.7巨噬細(xì)胞，獲得過(guò)表達(dá)SRSF3基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SRSF3的RAW?264.7細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，步驟一中，以序列表SEQ?ID?NO.4所示的Lenti-Flag-hyg載體和SRSF3基因制得Lenti-Flag-hyg-SRSF3目的質(zhì)粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SRSF3的RAW?264.7細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，步驟一中，對(duì)SRSF3基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增、電泳、回收后，將回收的SRSF3基因條帶與Lenti-Flag-hyg載體進(jìn)行雙酶切，再次電泳和回收，而后采用連接酶連接。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SRSF3的RAW?264.7細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，步驟一中，采用T4DNA連接酶連接，SRSF3與Lenti-Flag-hyg載體的質(zhì)量比為10:3～10:10。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SRSF3的RAW?264.7細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，步驟一中，還包括將SRSF3基因和Lenti-Flag-hyg載體的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細(xì)胞DH5α中進(jìn)行表達(dá)，而后提取Lenti-Flag-hyg-SRSF3目的質(zhì)粒。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SRSF3的RAW?264.7細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，步驟二中，Lenti-Flag-hyg-SRSF3目的質(zhì)粒、psPAX2、pMD2.G質(zhì)量比為(1～3):2:1。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SRSF3的RAW?264.7細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，步驟三中將慢病毒感染RAW?264.7細(xì)胞后，加潮霉素B進(jìn)行篩選，得到穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SRSF3的RAW?264.7細(xì)胞系。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SRSF3的RAW?264.7細(xì)胞系的應(yīng)用，其特征在于，在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SRSF3的RAW?264.7細(xì)胞系的應(yīng)用，其特征在于，在制備自噬抑制劑藥物中的應(yīng)用。