[發明專利]一種用于檢疫鑒定黃瓜綠斑駁花葉病毒的種子粉基體標準樣品制備方法在審
| 申請號： | 202210492051.5 | 申請日： | 2022-05-07 |
| 公開（公告）號： | CN114891914A | 公開（公告）日： | 2022-08-12 |
| 發明（設計）人： | 曹際娟;尹新穎;徐藝玲;劉奕鑾;張一;陸忠婷;閆爽;馬超 | 申請（專利權）人： | 大連民族大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;G01N33/68 |
| 代理公司： | 大連智高專利事務所(特殊普通合伙) 21235 | 代理人： | 胡景波 |
| 地址： | 116600 遼寧省*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 檢疫 鑒定 黃瓜 斑駁 花葉 病毒 種子 基體 標準 樣品 制備 方法 | ||
1.一種用于檢疫鑒定黃瓜綠斑駁花葉病毒的種子粉基體標準樣品制備方法，其特征是，具體包括以下步驟：
(1)種子批中感染的CGMMV野生株鑒定：種子批中感染的CGMMV為西葫蘆種子攜帶的野生株，選用經鑒定為CGMMV陽性的野生株；
(2)確定原料重量：確定需要制備的檢疫鑒定種子及其制品植物病害的CGMMV種子粉基體標準樣品的原料重量；
(3)低溫研磨：將步驟(2)混雜有感染CGMMV的一批種子，放置于超低溫冰箱中充分冷凍，采用粉碎機進行粉碎，得到種子粉；
(4)篩分處理：將步驟(3)粉碎好的混雜感染CGMMV種子粉篩分，過金屬篩得到顆粒均勻的種子微粉；
(5)攪拌混勻：步驟(4)過篩后的混雜感染CGMMV種子微粉裝于無菌包裝袋中置于干粉混勻器上搖晃混勻，得到均勻性符合國家標準樣品性能要求的標準樣品；
(6)分裝儲存及性能評價：將步驟(5)制備的CGMMV種子基體標準樣品分裝于樣品瓶，采用三級密封裝置封存，放置于低溫條件長期儲存，隨機抽取樣品進行均勻性、穩定性檢驗評價；
(7)溯源性描述：將步驟(1)-(6)處理后的種子粉基體標準樣品進行CGMMV野生株經靶標基因序列測序及序列同源性比對分析；
(8)聯合定值：將步驟(1)-(6)處理后的種子粉基體標準樣品進行隨機抽樣，由8家實驗室聯合確定本標準樣品的特性標準值。
2.如權利要求1所述的一種用于檢疫鑒定黃瓜綠斑駁花葉病毒的種子粉基體標準樣品制備方法，其特征是，步驟(2)中所述原料重量滿足每批次種子粉基體標準樣品制備至少300瓶，至少1g/瓶。
3.如權利要求1所述的一種用于檢疫鑒定黃瓜綠斑駁花葉病毒的種子粉基體標準樣品制備方法，其特征是，步驟(3)中放置于-80℃超低溫冰箱中充分冷凍至少24小時。
4.如權利要求1所述的一種用于檢疫鑒定黃瓜綠斑駁花葉病毒的種子粉基體標準樣品制備方法，其特征是，步驟(4)中所述金屬篩的目數至少為50目。
5.如權利要求1所述的一種用于檢疫鑒定黃瓜綠斑駁花葉病毒的種子粉基體標準樣品制備方法，其特征是，步驟(5)中搖晃混勻的時間至少為48小時。
6.如權利要求1所述的一種用于檢疫鑒定黃瓜綠斑駁花葉病毒的種子粉基體標準樣品制備方法，其特征是，步驟(6)中所述的三級密封裝置由硅膠蓋、鋁箔蓋、塑膠蓋組成。
7.如權利要求1所述的一種用于檢疫鑒定黃瓜綠斑駁花葉病毒的種子粉基體標準樣品制備方法，其特征是，步驟(6)中所述的低溫條件為-20℃以下。
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