[發明專利]柑橘木虱泛素結合酶E2J2基因在防控柑橘黃龍病中的應用

有效

• 申請號: 202210490662.6
• 申請日: 2022-05-07
• 公開（公告）號: CN114752610B
• 公開（公告）日: 2023-08-11
• 發明（設計）人: 盧占軍;曾祥東;張金波;余海中;方瑜婕;胡威;陳瑋;黃愛軍;彭婷;姚鋒先;鄒小金;謝廉頡;汪和貴;舒佳旺;劉淑婷
• 申請（專利權）人: 贛南師范大學
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N9/10;C12N15/87;A01G13/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 吳波

本發明提供了柑橘木虱泛素結合酶E2J2基因在防控柑橘黃龍病中的應用，屬于動物基因工程技術領域。本發明提供了核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的柑橘木虱泛素結合酶E2J2基因在防控柑橘黃龍病中的應用。本發明設計特異性引物合成dsRNA，借助RNA干擾沉默E2J2基因，檢測其基因沉默效率，后續放置在感染黃龍病菌的枝條上飼喂，探究此基因對黃龍病菌(CLas)侵染的影響。本發明通過阻斷黃龍病菌在柑橘木虱體內傳播途徑而不是控制木虱本身，為柑橘黃龍病的有效防控提供了一種新的策略，為控制細菌類病原借助媒介昆蟲的傳播提供新的防控思路。

技術領域

本發明屬于動物基因工程技術領域，尤其涉及柑橘木虱泛素結合酶E2J2基因在防控柑橘黃龍病中的應用。

背景技術

柑橘黃龍病(Huanglongbing，HLB)是世界柑橘產業中最具有毀滅性的病害之一。由于目前對黃龍病感病樹體尚無有效的治療方法，所以黃龍病又稱為柑橘的“癌癥”。至今黃龍病病菌仍不能進行人工培養，卻能在柑橘木虱體內長期生長繁殖，柑橘木虱一旦被黃龍病菌(CLas)侵染就能夠終身攜帶并迅速傳播，這給研究黃龍病及其防控帶來了巨大的困難，是近年來困擾柑橘產業的最大難題。當前國際柑橘產業對于黃龍病的控制主要局限于通過化學殺蟲劑控制柑橘木虱的發生，然而化學殺蟲劑的頻繁使用造成了農藥殘留、環境污染、生物多樣性被破壞和害蟲的抗藥性等諸多問題。因此提供一種快速和長效的控制黃龍病的新方法是十分有必要的。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供柑橘木虱泛素結合酶E2J2基因在防控柑橘黃龍病中的應用，通過阻斷CLas病菌在柑橘木虱體內傳播途徑而不是控制木虱本身進行防控HLB。本發明的目的之二在于提供一種降低CLas侵染柑橘木虱的方法。

為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供了柑橘木虱泛素結合酶E2J2基因在防控柑橘黃龍病中的應用，所述柑橘木虱泛素結合酶E2J2基因的cDNA序列如SEQ?ID?NO.1所示。

優選的，所述E2J2基因通過降低CLas侵染柑橘木虱發揮作用。

優選的，所述柑橘木虱泛素結合酶E2J2基因編碼的蛋白氨基酸序列如SEQ?IDNO.2所示。

本發明還提供了一種降低CLas侵染柑橘木虱的方法，包括如下步驟：將上述的E2J2基因在柑橘木虱中進行基因沉默。

優選的，所述基因沉默為采用RNA干擾技術進行基因沉默。

優選的，所述RNA干擾技術包括如下步驟：以柑橘木虱cDNA為模板，通過PCR技術，使用擴增引物獲得E2J2基因的部分片段，擴增產物連接入質粒中，以質粒為模板，用含啟動子的引物進行擴增，擴增產物膠回收，合成dsRNA；稀釋合成的dsRNA，飼喂柑橘木虱。

優選的，所述擴增引物為

PT-F:5'ATTCAAACCACCAAGCATCT?3'，

PT-R:5'TCTTCTTGTGCTCGTCTGTCT?3'。

優選的，所述含啟動子的引物為

RNAi-F:TAATACGACTCACTATAGGGATTCAAACCACCAAGCATCT，

RNAi-R:TAATACGACTCACTATAGGGTCTTCTTGTGCTCGTCTGTCT。

優選的，所述質粒為pMD19-t質粒。

優選的，飼喂的柑橘木虱為4-5齡柑橘木虱若蟲。

本發明的有益效果：