[發(fā)明專利]同步檢測5種柑橘病毒的DPO RT-PCR引物組、檢測方法、試劑盒及其應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210476485.6 | 申請日： | 2022-04-29 |
| 公開（公告）號： | CN114790496A | 公開（公告）日： | 2022-07-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李戰(zhàn)彪;莫翠萍;謝慧婷;崔麗賢;陳錦清;林林;羅婉笛;李金哲;蔡健和;秦碧霞 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/94 |
| 代理公司： | 南寧頌博遠(yuǎn)信知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 45141 | 代理人： | 蘭亞君 |
| 地址： | 530007 廣西壯族*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 同步 檢測 柑橘 病毒 dpo rt pcr 引物 方法 試劑盒 及其 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明公開了一種同步檢測5種柑橘病毒的DPO RT?PCR引物組、檢測方法、試劑盒及其應(yīng)用，引物組的序列如SEQ ID NO.1?SEQ ID NO.10所示。本發(fā)明通過對柑橘衰退病毒、柑橘碎葉病毒、柑橘裂皮病毒、柑橘黃化脈明病毒、柑橘葉斑駁病毒設(shè)計特異性DPORT?PCR引物，檢測引物可有效去除引物二聚體干擾，可同時從樣品中檢測出這5種病毒，檢測方法簡便高效，僅需要使用普通PCR儀和電泳儀即可進行檢測，具有快速、經(jīng)濟、準(zhǔn)確度高和靈敏度高的特點，可用于田間柑橘植株的大規(guī)模篩查和種苗調(diào)運前的防疫檢測，為健康種苗檢測及病害的田間篩查提供了技術(shù)支撐。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于植物病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種同步檢測5種柑橘病毒的DPORT-PCR引物組、檢測方法、試劑盒及其應(yīng)用。
背景技術(shù)
隨著柑橘種植面積不斷擴大和新品種引進種植，區(qū)域間種苗調(diào)運頻繁；由于難于監(jiān)管， 導(dǎo)致多種病蟲害通過種苗攜帶傳播流行，并造成嚴(yán)重危害，其中，病毒病害尤其突出。
柑橘衰退病毒(Citrus tristezavirus,CTV)引起柑橘樹勢衰退、枝條莖陷點、果實變 小等癥狀；柑橘碎葉病毒(Citrus tatter leafvirus,CTLV)引起植株黃化衰弱，嚴(yán)重時整株 枯死；柑橘裂皮病毒(Citrus exocortis viroid，CEVd)的病樹矮化，新梢少而弱，葉片小 且多數(shù)呈缺鋅癥狀，病樹開花多，但落花落果嚴(yán)重，產(chǎn)量低；柑橘黃化脈明病毒(Citrus yellow vein clearing virus，CYVCV)能感染檸檬、酸橙、甜橙等大多數(shù)柑橘種類，會引起不同程 度的脈明、褪綠和花葉癥狀，在砂糖橘上會造成嚴(yán)重的葉卷；柑橘葉斑駁病毒(Citrus leaf blotchvirus，CLBV)侵染柑橘屬植物后，可引起枳橙或柚子作為砧木上的接穗異常結(jié)合， 柑橘的接穗與砧木的不親和性會直接危害柑橘樹的生長，進而造成柑橘產(chǎn)業(yè)重大的經(jīng)濟損 失。上述5種柑橘病毒是較為常見的侵染柑橘的RNA病毒，可經(jīng)介體蚜蟲、接穗進行傳 播，而帶毒苗木的大范圍調(diào)運則增加了病毒病遠(yuǎn)距離傳播的風(fēng)險，因此，建立高效、特異、 靈敏度高的病毒檢測方法有利于防止柑橘病毒隨苗木傳播的風(fēng)險，從源頭控制該類病害。
雙啟動寡核苷酸引物(dual-primering oligonucleotide，DPO)是一種新型的PCR引物 設(shè)計方法，具有特異性高，引物設(shè)計簡單等優(yōu)點。目前已廣泛應(yīng)用于多種病原菌、病毒病 原的檢測中。
公開于該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不應(yīng)當(dāng)被 視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題，提供同步檢測5種柑橘病毒的DPO RT-PCR 引物組、檢測方法、試劑盒及其應(yīng)用。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：
一種同步檢測5種柑橘病毒的OPO RT-PCR引物組，包括2條柑橘衰退病毒(CTV) 特異性引物，2條柑橘碎葉病毒(CTLV)特異性引物，2條柑橘裂皮病毒(CEVd)的特 異性引物，2條柑橘黃化脈明病毒(CYVCV)特異性引物，2條柑橘葉斑駁病毒(CLBV) 的特異性引物，具體如下：
DPO-CTV-F：5’-TGGCTCGTAGACACCIIIIICGTTCTCCGG-3’，如SEQ ID NO.1所示；
DPO-CTV-R:5’-CTAAGGAGAACTTCTTIIIIICACGCATACG-3’，如SEQ ID NO.2所示；
DPO-CTLV-F：5’-TGCTTCAACAAGCGAGGCIIIIICGGGTAGGAG-3’，如SEQ ID NO.3 所示；
DPO-CTLV-R:5’-GTATAAAGGCAGGCATGTCAIIIIICAAGACCGCG-3’，如SEQ ID NO.4所示；
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