[發明專利]一種以ACE2靶向遞送shRNA的ACE2siRNA藥物制備方法

在審

• 申請號: 202210473225.3
• 申請日: 2022-05-01
• 公開（公告）號: CN114870026A
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: 翁炳煥;王偉平;師越;俞光平;陳敏;楊艷梅;俞佳玲;王庭璋;楊昊堃;楊含金
• 申請（專利權）人: 杭州癡創生物科技有限公司
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;A61K31/713;A61P31/14;C12N15/113
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1.一種以ACE2靶向遞送shRNA的ACE2siRNA藥物制備方法，其特征在于，合成以ACE2中和冠狀病毒并以ACE2靶向遞送冠狀病毒共有RNAi序列shRNA的ACE2siRNA，包括分別合成以冠狀病毒共有保守基因為RNA干擾靶標的shRNA和以冠狀病毒受體結合域RBD為配體的ACE2，然后將合成的ACE2分別連接到合成的shRNA的正反義鏈上，構成由ACE2和shRNA組成的ACE2siRNA，經進一步的脂質體修飾，使被ACE2靶向遞送的shRNA特異性間接結合病毒RBD，形成shRNA-ACE2-RBD-病毒的復合物，使shRNA被復合物靶向遞送并隨著病毒的感染進入表達ACE2的靶細胞漿，起靶向病毒感染細胞的廣譜抗病毒作用。

2.根據權利要求1所述的一種以ACE2靶向遞送shRNA的ACE2siRNA藥物制備方法，其特征在于，所述以共有保守基因為RNA干擾靶標是指用于合成shRNA的siRNA選自數據庫記載的各種致病性冠狀病毒及其變異毒株的共有保守基因，使合成的shRNA靶向干擾所述共有保守基因，從而起廣譜抗新冠病毒變異毒株的作用；所述共有保守基因包括但不限于超保守基因、保守基因和/或由保守微衛星拼接的基因。

3.根據權利要求1、2所述的一種以ACE2靶向遞送shRNA的ACE2siRNA藥物制備方法，其特征在于，所述合成shRNA包括但不限于首先合成2條互補的約21-25nt的siRNA寡核苷酸多肽以及合成起間隔作用的loop環堿基序列，然后將所合成的siRNA和loop環連接成由loop環間隔成的小發夾shRNA雙鏈，繼之在shRNA雙鏈的每條單鏈上各連接ACE2多肽。

4.根據權利要求1、3所述的一種以ACE2靶向遞送shRNA的ACE2siRNA藥物制備方法，其特征在于，所述合成shRNA的siRNA序列包括但不限于SEQ ID NO.1～58。

5.根據權利要求1、4所述的一種以ACE2靶向遞送shRNA的ACE2siRNA藥物制備方法，其特征在于，所述合成shRNA的siRNA序列包括但不限于新型冠狀病毒共有RNAi序列SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.8～10、SEQ ID NO.16～18、SEQ ID NO.20～22、SEQ ID NO.30～32、SEQ ID NO.41～58。

6.根據權利要求1、5所述的一種以ACE2靶向遞送shRNA的ACE2siRNA藥物制備方法，其特征在于，所述合成shRNA的siRNA序列進一步優選為靶向冠狀病毒N基因的SEQ ID NO.16-18和SEQ ID NO.49-51，靶向冠狀病毒ORF1ab基因的SEQ ID NO.20-22和SEQ ID NO.52-54，以及靶向冠狀病毒S基因的SEQ ID NO.30-32和SEQ ID NO.56-58；所述合成shRNA的siRNA序列進一步優選為靶向N基因的SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.49，靶向ORF1ab基因的SEQ IDNO.21和SEQ ID NO.52，靶向S基因的SEQ ID NO.30；所述合成shRNA的siRNA序列進一步優選為SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.49和SEQ ID NO.30。

7.根據權利要求1、3所述的一種以ACE2靶向遞送shRNA的ACE2siRNA藥物制備方法，其特征在于，所述ACE2siRNA包括將所述ACE2與所述shRNA和/或siRNA連接成化合物，或將所述shRNA和/或siRNA插入到所述ACE2多肽中間，連接成化合物，包括進而以脂質體修飾化合物。

8.根據權利要求1、7所述的一種以ACE2靶向遞送shRNA的ACE2siRNA藥物制備方法，其特征在于，所述ACE2包括但不限于第1-740位氨基酸的胞外ACE2、第741-763位氨基酸的跨膜ACE2、第764-805位氨基酸的胞內ACE2以及經氨基酸序列優化的ACE2多肽。