[發(fā)明專利]一種榛蘑抗氧化肽的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210464362.0
• 申請日: 2022-04-29
• 公開（公告）號(hào): CN114717286A
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李艷麗;張倩;張文博;陳瀅竹;王剛;張斯童;陳光
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/14;C07K1/16;A61K38/01;A61P39/06
• 代理公司: 重慶晶智匯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50229
• 代理人: 李靖

1.一種榛蘑抗氧化肽的制備方法，其特征在于：以榛蘑為原料依次進(jìn)行蛋白的提取、沉淀、水解和分離純化，所述蛋白的提取是先采用堿提，再將堿提后的殘?jiān)M(jìn)行超聲堿提，所述沉淀是依次進(jìn)行等電點(diǎn)法和鹽析法進(jìn)行沉淀，最后干燥制成榛蘑蛋白粉。

2.如權(quán)利要求1所述的一種榛蘑抗氧化肽的制備方法，其特征在于：所述堿提是將榛蘑粉碎后加入蒸餾水中，攪拌均勻，加入濃度為0.1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)溶液pH至10，在80℃下水浴1.5h，然后進(jìn)行離心處理。

3.如權(quán)利要求1或2所述的一種榛蘑抗氧化肽的制備方法，其特征在于：所述榛蘑和蒸餾水的料液比為1:45，離心轉(zhuǎn)速為10000rpmm，離心時(shí)間為20min。

4.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的一種榛蘑抗氧化肽的制備方法，其特征在于：所述超聲堿提是將堿提后的殘?jiān)尤胝麴s水，料液比為1:45，混合均勻后用濃度為0.1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH為9，然后室溫下以200W的功率進(jìn)行超聲14-16min。

5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的一種榛蘑抗氧化肽的制備方法，其特征在于：所述水解是將沉淀后的蛋白進(jìn)行冷凍干燥后依次采用超聲處理和風(fēng)味蛋白酶水解制備蛋白肽。

6.如權(quán)利要求5所述的一種榛蘑抗氧化肽的制備方法，其特征在于：所述超聲處理是將榛蘑蛋白粉配制為質(zhì)量濃度為3-4%的溶液，室溫下采用200W超聲處理15min。

7.如權(quán)利要求5或6所述的一種榛蘑抗氧化肽的制備方法，其特征在于：所述風(fēng)味蛋白酶水解是將超聲處理后的溶液采用風(fēng)味蛋白酶進(jìn)行水解，水解溫度為38-42℃，水解時(shí)間為2-3h。

8.如權(quán)利要求5-7任一項(xiàng)所述的一種榛蘑抗氧化肽的制備方法，其特征在于：所述水解pH為7，風(fēng)味蛋白酶的用量為榛蘑蛋白粉質(zhì)量的3.5%。

9.一種榛蘑抗氧化肽的制備方法，其特征在于，按如下步驟進(jìn)行：

（一）提取蛋白

（1）將榛蘑洗凈晾干、粉碎后過60目篩，按照料液比為1:45加入蒸餾水中，混合均勻后，用0.1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH至10，在80℃下水浴1.5h；

（2）堿提完成后過濾出殘?jiān)凑樟弦罕葹?:45加入蒸餾水，混合均勻后，加入0.1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH至9，常溫下用200W功率超聲處理14-16min；

（3）將提取完成后的上清液用0.1mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH為3.6-3.7，然后置于4℃下靜置12h，然后在該溫度下以10000rpm離心20min，得蛋白1，取等電點(diǎn)沉淀后的上清液，加入飽和硫酸銨溶液，使其飽和度為90%，置于4℃靜置12h，然后在該溫度下以10000rpm離心20min得蛋白2；

（4）將蛋白1和蛋白2混合后冷凍干燥得榛蘑蛋白粉 ；

（二）榛蘑抗氧化肽制備

（1）將榛蘑蛋白粉配制成質(zhì)量濃度為3-4%的水溶液，常溫下用功率為200W的超聲處理15min，然后加入風(fēng)味蛋白酶，調(diào)節(jié)pH為7，在38-42℃下水解2-3h，酶的添加量為榛蘑蛋白粉質(zhì)量的4.5%；

（2）水解結(jié)束后，將水解液沸水浴滅活15min，冷卻后將水解液分別用3kD、5kD和10kD的超濾膜進(jìn)行超濾處理得不同分子量的多肽液，進(jìn)行冷凍干燥得不同分子量的抗氧化肽。

10.如權(quán)利要求9所述的一種榛蘑抗氧化肽的制備方法，其特征在于：將所述抗氧化肽配制成濃度為30mg/L的溶液，采用葡聚糖凝膠（Sephadex G-25）進(jìn)行過濾層析，然后用純水以2-3mL/5min的速率洗脫，對洗脫峰處的樣品進(jìn)行收集，分為抗氧化肽1和抗氧化肽2，濃縮后凍干。