[發明專利]一種從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法

在審

• 申請號: 202210461036.4
• 申請日: 2022-04-28
• 公開（公告）號: CN114644984A
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 高翠娟;劉晶晶;李軍奇;李德龍
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N1/20;C12N1/14;C12R1/11;C12R1/01;C12R1/465;C12R1/685;C12R1/67;C12R1/80;C12R1/82;C12R1/645
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 鄭平

本發明屬于微生物領域，涉及一種從土壤中篩選產淀粉酶的微生物的方法，并進行了菌株鑒定。通過碘染色法產生水解圈進行初篩，采用3，5?二硝基水楊酸(DNS)比色法對酶活性進行測定，目的是為工業生產提供產酶能力優越的菌株。結果顯示：篩選的31株產淀粉酶菌株分屬于10個屬，包括9株芽孢桿菌屬(Bacillus)、1株類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)、4株鏈霉菌屬(Streptomyces)、2株腸桿菌屬(Enterobacter)、4株曲霉屬(Aspergillus)、2株擬青霉屬(Simplicillium)、7株青霉屬(Penicillium)、1株鏈孢格屬(Alternaria)、1株枝孢屬(Cladosporium)。其中鏈霉菌，黃曲霉，黑曲霉的淀粉酶活性較高。

技術領域

本發明屬于微生物領域，具體涉及一種從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

淀粉是高等植物自然儲存的多糖，是由葡萄糖分子聚合而成的均聚物。它具有良好的生物降解性和可再生性。淀粉制品不僅仍然是現今人類所不可或缺的基本食物來源，也為現代工業和生產活動提供了大量重要的原材料。利用淀粉酶對淀粉進行異糖化的作用而產生葡萄糖、麥芽糊精糖和麥芽糖等。

淀粉酶作為一種生物催化劑，是中國最早的投入研制到實現工業化的生產應用的主要酶制劑種類之一。按照其水解作用方式的不同，可以將淀粉酶分為兩大類，分別為α-淀粉酶、β-淀粉酶。作為生活中常用的淀粉酶，α-淀粉酶是一種鈣金屬酶，在缺鈣時不能發揮作用。它能催化淀粉及其衍生物內部的α-1，4-糖苷鍵斷裂，也能跨越α-1，6-糖苷鍵。其在動物消化方面起到促進作用。β-淀粉酶是一類可以把淀粉水解為麥芽糖的作用酶。僅作用于非還原端，每次切割下一個麥芽糖為單位，主要催化α-1，4-糖苷鍵。常見于甘薯中，不存在于動物組織中。淀粉酶的生產制備方法包括微生物發酵及動植物提取。微生物發酵產淀粉酶具有高穩定性，高生產率和較低的生產成本等優點，所以工業應用上優先選擇微生物發酵法。淀粉酶的用途廣泛，涉及到食品業、紡織業、造紙業、醫療衛生、飼料業等工業中，并且在環境保護、化學試劑生產等方面也發揮了重要作用，有較高的經濟價值和社會效益，其產量約占工業酶總產量的85％以上。隨著近幾年學術界對生物制酶工業及其發展現狀的認識的提高，選育高產淀粉酶的優良菌株日益成為一個當下重要研究和發展熱點。目前仍然以自然分離野生型產酶菌株后馴化或誘變育種為主，需要持續從自然界中篩選挖掘具有較高性能的菌株，為淀粉酶的工業生產提供新的選擇，增添新的動力，盡可能的為工業生產方面減少人力、物力等成本。

土壤中蘊含著豐富的微生物資源，富含可以產生出各種特殊酶類作用的優良菌株。從土壤微生物中分離出來的產淀粉酶菌株大多以芽孢桿菌屬為主，例如Bacillusmegaterium(巨大芽孢桿菌)、Bacillus amyloliquefaciens(解淀粉芽孢桿菌)等，也有分離出放線菌，曲霉，酵母等微生物。針對淀粉酶的研究，目前集中于產淀粉酶菌株的選育，基于產酶條件的培養基優化與控制和菌株誘變效應等機制的研究。但仍缺少擁有優越性能，酶的生物活性較高的菌株，以滿足工業生產的需求。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：以下所涉及的漿料的濃度若無特殊說明，均為質量百分數；所涉及的試劑、藥品的用量，若無特殊說明，都是相對于絕干漿而言。

本發明的第一個方面，提供了一種從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法，包括：

取地表土壤，加入無菌水，混合均勻，得到樣品稀釋液；

將所述樣品稀釋液注入固體篩選培養基進行倒置培養，然后，對不同形態的單菌落進行分類和純化，保藏；