[發明專利]一種從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法

在審

• 申請號: 202210461036.4
• 申請日: 2022-04-28
• 公開（公告）號: CN114644984A
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 高翠娟;劉晶晶;李軍奇;李德龍
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N1/20;C12N1/14;C12R1/11;C12R1/01;C12R1/465;C12R1/685;C12R1/67;C12R1/80;C12R1/82;C12R1/645
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 鄭平

1.一種從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，包括：

取地表土壤，加入無菌水，混合均勻，得到樣品稀釋液；

將所述樣品稀釋液注入固體篩選培養基進行倒置培養，然后，對不同形態的單菌落進行分類和純化，保藏；

對純化的菌株進行分子生物學鑒定、溶圈試驗、酶活性測定，得到產淀粉酶的微生物。

2.如權利要求1所述的從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，取地表5～10cm深的土壤。

3.如權利要求1所述的從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，固體篩選培養基中各物質的濃度為：硫酸銨10～12g/L、氯化鈉5～8g/L、磷酸氫二鈉8～10g/L、可溶性淀粉10～20g/L，另外加入1.5％～2％瓊脂粉。

4.如權利要求1所述的從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，富集培養基中各物質的濃度為：蛋白胨10～12g/L、氯化鈉10～12g/L、酵母粉5～8g/L、可溶性淀粉10～12g/L。

5.如權利要求1所述的從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，液體淀粉培養基：蛋白胨1～3g/L、可溶性淀粉10～12g/L、酵母粉0.5～0.8g/L、氯化鈉1～3g/L、磷酸氫二鉀2～4g/L、硫酸鎂0.1～0.3g/L、氯化鈣0.1～0.3g/L、硫酸錳0.001～0.003g/L。

6.如權利要求1所述的從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，倒置培養的條件為：35～37℃下培養2～3天。

7.如權利要求1所述的從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，采用快速提取酵母DNA方法提取菌株的基因組DNA。

8.如權利要求1所述的從土壤中分離產淀粉酶的微生物的方法，其特征在于，采用3,5-二硝基水楊酸DNS比色法進行淀粉酶活性的測定實驗。

9.權利要求1～8任一項所述的方法篩選出的產淀粉酶的微生物。

10.權利要求9所述的產淀粉酶的微生物，其特征在于，所述微生物為巨大芽孢桿菌Bacillus megaterium、燦爛類芽孢桿菌Paenibacillus lautus、草地鏈霉菌Streptomycespratensis、細黃鏈霉菌Streptomyces microflavus、暗黑鏈霉菌Streptomyces atratus、田無鏈霉菌Streptomyces tanashiensis、華西腸桿菌Enterobacter huaxiensis、非脫羧勒克菌Leclercia adecarboxylata、黑曲霉Aspergillus niger、黃曲霉Aspergillusflavus、DT06Simplicillium lanosoniveum、產紅青霉Penicillium rubens、酒色青霉Penicillium vinaceum、產黃青霉Penicilliumchrysogenum，鏈格孢Alternariaalternata、枝孢菌Cladosporium allicinum中的至少一株。