[發明專利]一種川貝母鱗莖組織培養再生方法

有效

• 申請號: 202210459866.3
• 申請日: 2022-04-28
• 公開（公告）號: CN114847159B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 張連娟;林亮;萬陽;袁萬立;王亞金;張方圓;張權
• 申請（專利權）人: 云南龍藏生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州駿思知識產權代理有限公司 44425
• 代理人: 李國釗

本發明涉及一種川貝母鱗莖組織培養再生方法。本發明所述的川貝母鱗莖組織培養再生方法包括以下環節：S1外植體處理、S2胚性愈傷組織誘導、S3增殖培養、S4分化培養、S5萌發培養、S6植株再生。其中本發明提供的川貝母鱗莖組織培養再生方法通過在液體環境對川貝母鱗莖愈傷組織進行增殖培養實現短時間內大量增殖，并通過在萌發培養環節對體胚進行短期低溫暗培養處理提高體胚的萌發率，從而進一步提高植株的增殖效率。

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術，特別是涉及一種快速獲得大量再生植株的川貝母鱗莖組織培養再生方法。

背景技術

川貝母(Fritillaria?cirrhosa?D.Don)為百合科,貝母屬多年生草本植物。以干燥鱗莖入藥，味苦、性寒,有清熱潤肺，化痰止咳，散結消癰等功效，是治療肺熱燥咳，干咳少痰，陰虛勞嗽，痰中帶血，瘰疬的重要中藥材。川貝母主要分布在四川、云南、西藏等地，多長于海拔2800～4700米林中、灌叢下、草地、河灘、山谷等濕地或巖縫中，喜冷涼氣候條件，具有耐寒、喜濕、喜蔭蔽的特性。氣溫高于30℃或地溫高于25℃時，植株就會枯萎；因此，在海拔低、氣溫高的地區不能存活。川貝母的繁殖方式主要分為種子繁殖和鱗莖繁殖。但由于其特殊的生境，在自然界中川貝母種子繁殖休眠期長、自然萌發率低，出苗率差；而人工栽培時，鱗莖繁殖系數也較低；因此，川貝母歷來以采挖野生資源為主，但隨著市場對川貝母需求的日益增長，野生川貝母被過度采挖導致資源緊缺，瀕臨滅絕，目前川貝母野生資源已遠遠不能滿足市場所需，因此如何現實有效解決川貝母資源短缺問題已變得十分迫切。

利用懸浮培養技術可以在短期內獲得大量川貝母再生植株，并且不受季節和環境等因素的限制。而且懸浮培養還具有用材少，繁殖效率高，遺傳穩定的特點，因此，從野生川貝母種源中選出優良單株再利用懸浮培養技術來實現川貝母的工廠化生產是解決川貝母資源短缺問題最有效的方法之一。目前雖然已有利用懸浮培養技術獲得川貝母再生植株的研究，但是還存在增殖時間長，體胚萌發率低等影響川貝母再生植株增殖率的缺陷。

發明內容

基于此，本發明的目的在于，提供一種川貝母鱗莖組織培養再生方法，其具有快速獲得大量川貝母再生植株的優點。

一種川貝母鱗莖組織培養再生方法，包括以下步驟：

S1外植體處理：選川貝母鱗片作為外植體，消毒，備用；

S2胚性愈傷組織誘導：將S1處理后的鱗片接種至胚性愈傷誘導培養基中，在25±2℃下暗培養至形成胚性愈傷組織；

S3增殖培養：將S2中獲得的胚性愈傷組織按40g/L轉接至增殖培養基中，在25℃恒溫搖床上120r/min暗培養，每15日繼代1次，連續繼代4次；

S4分化培養：對S3中獲得的培養物離心去上清后，將留下的細胞團轉接至分化培養基中，在25℃恒溫搖床上120r/min暗培養，期間至少更換一次培養基，直至分化出直徑為1～2mm的體胚；

S5萌發培養：將S4獲得的體胚接種到體胚萌發培養基上進行萌發，先將體胚置于10℃下暗培養7～14日，然后再將其轉至培養條件溫度為20～25℃，光周期8/16h，光照強度1000～1500Lux的環境下進行培養至體胚發育成基部有白色粗根的乳白色小鱗莖；

S6植株再生：將S5中得到的已生根的小鱗莖從愈傷組織中分離并轉接到SH基礎培養基上繼續培養至小鱗莖分化抽芽，期間至少更換一次新鮮培養基，培養條件為20～25℃，光周期12/12h，光照強度2000Lux；

所述胚性愈傷誘導培養基以每升計算，其制備方法為：在SH培養基母液中加入1～2mg的2,4-D、0.5～1mg的6-BA、0.5～2mg的NAA和30g蔗糖后用水定容至于一升，調節pH至5.8，最后加入2.5g的瓊脂；

所述增殖培養基以每升計算，其制備方法為：在SH培養基母液中加入1～2mg的2,4-D、0.5～1mg的NAA和30g蔗糖后用水定容至一升，調節pH至5.8；