[發明專利]一種可以高精確度和敏感性識別豬偽狂犬病毒的納米抗體、制備方法和應用

有效

• 申請號: 202210457710.1
• 申請日: 2022-04-28
• 公開（公告）號: CN114736290B
• 公開（公告）日: 2023-07-11
• 發明（設計）人: 駱璐;董春霞;費磊;陳忠瓊;凌洪權;歐陽吳莉;蔣佳利;姜東平;楊婭
• 申請（專利權）人: 重慶市動物疫病預防控制中心
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/558
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種識別豬偽狂犬病毒的納米抗體，所述納米抗體靶向的是PRV的gB蛋白和gC蛋白的抗原表位融合蛋白，將其命名為PRV-BC21，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.3所示，其制備方法包括以下步驟：

(1)重組真核表達載體的構建：通過PCR擴增、酶切，將編碼納米抗體PRV-BC21的DNA序列連接至表達載體中獲得陽性質粒；

(2)將步驟(1)中陽性質粒轉化宿主細胞，誘導表達納米抗體PRV-BC21。

2.一種豬偽狂犬病毒的快速檢測試紙條，其特征在于所述豬偽狂犬病毒的快速檢測試紙條包括底板、吸水墊紙、NC膜、金墊、樣品層析墊，從底板上從上到下依次粘貼吸水墊紙、NC膜、金墊、樣品層析墊，其中所述金墊上設置有膠體金標記的納米抗體PRV-BC21；所述NC膜上設置有相互分離的檢測區和質控區，所述檢測區噴涂PRV包被抗原，所述質控區噴涂有與膠體金標記的納米抗體PRV-BC21特異結合的抗體，其中納米抗體PRV-BC21的氨基酸序列如SEQ?ID?No.3所示。

3.一種豬偽狂犬病毒的快速檢測試紙條的制備方法，

1)純化納米抗體PRV-BC21，透析待用；

2)膠體金標記納米抗體PRV-BC21；

3)BSA封閉反應；

4)離心后用含1％BSA的PBS液洗滌保留沉淀；

5)復溶后噴涂金標墊；

6)包被NC膜；

7)在室溫低濕度條件下進行干燥；從底板上從上到下依次粘貼吸水紙、NC膜、金墊、樣品層析墊，裁切待用；

8)對膠體金試紙條進行應用測試，得出膠體金試紙條的檢測限為10ng/mL級別，能滿足快速檢測PRV的要求，其中納米抗體PRV-BC21的氨基酸序列如SEQ?ID?No.3所示。

4.權利要求3中所述的豬偽狂犬病毒的快速檢測試紙條在豬偽狂犬病毒的非疾病診斷的快速檢測中的應用。

5.權利要求1所述的一種識別豬偽狂犬病毒的納米抗體在豬偽狂犬病毒的非疾病診斷的快速檢測中的應用。