[發明專利]一種lgals3bpb基因的啟動子以及在構建斑馬魚模型中的應用

在審

• 申請號: 202210457052.6
• 申請日: 2022-04-27
• 公開（公告）號: CN114591962A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 李禮;賀蔣勇;趙方瑩;陳冰玥;崔念飛;李智繁
• 申請（專利權）人: 中國科學院重慶綠色智能技術研究院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 陳雍

本發明涉及神經細胞標記方法以及相關動物模型技術領域，具體涉及一種lgals3bpb基因的啟動子以及在構建斑馬魚模型中的應用。lgals3bpb基因的啟動子在構建斑馬魚模型中的應用，包括以下依次進行的步驟：經PCR反應獲得lgals3bpb基因啟動子；構建lgals3bpb基因啟動子調控的表達載體；將所述表達載體轉入斑馬魚受精卵中，經過培養、篩選和多代雜交，獲得穩定遺傳的轉基因斑馬魚品系。本技術方案可以解決現有技術中由于缺少能夠對小神經膠質細胞進行定位和操作的斑馬魚動物模型的技術問題，為研究小神經膠質細胞、進行疾病作用機制研究、藥物篩選和藥效測試創造了條件，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及神經細胞標記方法以及相關動物模型技術領域，具體涉及一種lgals3bpb基因的啟動子以及在構建斑馬魚模型中的應用。

背景技術

斑馬魚(Danio rerio)是一種常見的熱帶魚，斑馬魚的細胞標記技術、組織移植技術、突變技術、單倍體育種技術、轉基因技術、基因活性抑制技術等已經成熟，且有數以千計的斑馬魚胚胎突變體，是研究胚胎發育分子機制的優良資源，有的還可做為人類疾病模型。由于斑馬魚基因與人類基因的相似度達到87％，這意味著在其身上做藥物實驗所得到的結果在多數情況下也適用于人體；斑馬魚的胚胎是透明的，所以生物學家很容易觀察到藥物對其體內器官的影響；雌性斑馬魚可產卵200枚，胚胎在24小時內就可發育成形，這使得生物學家可以在同一代魚身上進行不同的實驗，進而研究病理演化過程并找到病因。

小神經膠質細胞(microglia)是中樞神經系統的組織定居巨噬細胞，其作用包括清除細胞碎片、向神經元和星形膠質細胞傳遞信號以介導突觸連接以及保持總數神經系統的穩態。非常有必要對小神經膠質細胞進行全面研究，了解其發生發展機制，對相關疾病的研究具有重要意義。由于斑馬魚模型的上述優勢，越來越多的研究人員使用斑馬魚模型來研究小神經膠質細胞。以斑馬魚作為動物模型，對小神經膠質細胞進行實驗研究，首先需要我們能夠對斑馬魚活體內的小神經膠質細胞進行特異性標記和操作，這就對研究手段和方法提出了較高的要求。雖然，現有研究中揭示了一些在小神經膠質細胞中特異表達的基因，理論上，利用這些基因的啟動子可以控制一些效應基因在小神經膠質細胞中產生特異性作用。

目前用于標記小神經膠質細胞的基因也僅有apoeb和ccl34b.1兩個，基于上述兩基因的轉基因品系均通過BAC(Bacterial artificial chromosome，人工染色體)介導的轉基因技術獲得，但是仍未確定可靠的標記小膠質細胞的啟動子序列，不能夠根據研究目的進行隨意操作，給研究工作帶來了較大的局限。不同基因啟動子的長度以及分布各異，在大量的小神經膠質細胞的特異表達基因中難以有效捕獲性能理想的啟動子序列。并且在某些情況下，即使捕獲啟動子之后，該啟動子在斑馬魚動物模型中也難以有效啟動效應基因的表達。

綜上，亟需構建一種能夠對小神經膠質細胞進行定位和操作的斑馬魚動物模型，以滿足疾病作用機制研究、藥物篩選和藥效測試的需求。

發明內容

本發明意在提供一種lgals3bpb基因的啟動子在構建斑馬魚模型中的應用，以解決現有技術中由于缺少能夠對小神經膠質細胞進行定位和操作的斑馬魚動物模型的技術問題。

為達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種lgals3bpb基因的啟動子在構建斑馬魚模型中的應用，包括以下依次進行的步驟：

S1：經PCR反應獲得lgals3bpb基因啟動子；所述lgals3bpb基因啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

S2：將lgals3bpb基因啟動子整合在載體上，獲得表達載體；所述lgals3bpb基因啟動子用于控制熒光蛋白基因的表達；

S3：將所述表達載體轉入斑馬魚受精卵中，經過培養和篩選，獲得F0代斑馬魚；F0代斑馬魚與野生型斑馬魚經多代雜交，獲得穩定遺傳的轉基因斑馬魚品系。