[發明專利]一種lgals3bpb基因的啟動子以及在構建斑馬魚模型中的應用在審
| 申請號： | 202210457052.6 | 申請日： | 2022-04-27 |
| 公開（公告）號： | CN114591962A | 公開（公告）日： | 2022-06-07 |
| 發明（設計）人： | 李禮;賀蔣勇;趙方瑩;陳冰玥;崔念飛;李智繁 | 申請（專利權）人： | 中國科學院重慶綠色智能技術研究院 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217 | 代理人： | 陳雍 |
| 地址： | 400000 *** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 lgals3bpb 基因 啟動子 以及 構建 斑馬 模型 中的 應用 | ||
1.一種lgals3bpb基因的啟動子在構建斑馬魚模型中的應用，其特征在于，包括以下依次進行的步驟：
S1：經PCR反應獲得lgals3bpb基因啟動子；所述lgals3bpb基因啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
S2：將lgals3bpb基因啟動子整合在載體上，獲得表達載體；所述lgals3bpb基因啟動子用于控制熒光蛋白基因的表達；
S3：將所述表達載體轉入斑馬魚受精卵中，經過培養和篩選，獲得F0代斑馬魚；F0代斑馬魚與野生型斑馬魚經多代雜交，獲得穩定遺傳的轉基因斑馬魚品系。
2.根據權利要求1所述的一種lgals3bpb基因的啟動子在構建斑馬魚模型中的應用，其特征在于，在S1中，PCR反應的引物包括：
F1-lgals3bpb：5’-tcgaattcctgcagcccgggTGTTGCTCTGAAGTCAGAGG-3’；
R1-lgals3bpb：5’-GCTGTTGTACGTCCAAGTACCATTCATACTATTCACATTT-3’；
F2-lgals3bpb：5’-GTACTTGGACGTACAACAGC-3’；
R2-lgals3bpb：5’-tcctcgcccttgctcaccatGATGTCAGAAACAGCAACGA-3’。
3.根據權利要求2所述的一種lgals3bpb基因的啟動子在構建斑馬魚模型中的應用，其特征在于，在S3中，獲得F0代斑馬魚的方式為：將表達載體和轉座酶同時顯微注射到斑馬魚受精卵中；在受精后3天，篩選出表達所述熒光蛋白的受精卵；再培養至性成熟，獲得F0代斑馬魚。
4.根據權利要求3所述的一種lgals3bpb基因的啟動子在構建斑馬魚模型中的應用，其特征在于，在S3中，所述轉座酶的DNA模板的序列如SEQ ID NO.9所示。
5.根據權利要求4所述的一種lgals3bpb基因的啟動子在構建斑馬魚模型中的應用，其特征在于，在S3中，培養溫度為28.5℃。
6.使用權利要求5所述的一種lgals3bpb基因的啟動子在構建斑馬魚模型中的應用，其特征在于，在S3中，先將F0代斑馬魚與野生型斑馬魚交配，篩選出表達熒光蛋白的后代，獲得F1代斑馬魚；再將F1代斑馬魚與野生型斑馬魚交配，獲得穩定遺傳的轉基因斑馬魚品系。
7.根據權利要求6所述的一種lgals3bpb基因的啟動子在構建斑馬魚模型中的應用，其特征在于，在S1中，PCR反應的體系包括：18μL水、25μL緩沖液、0.5μL DNA聚合酶、1.5μL模板、2.5μL上游引物和2.5μL下游引物。
8.根據權利要求7所述的一種lgals3bpb基因的啟動子在構建斑馬魚模型中的應用，其特征在于,在S2中，所述熒光蛋白基因的序列如SEQ ID NO.6所示。
9.lgals3bpb基因的啟動子，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
10.根據權利要求9所述的lgals3bpb基因的啟動子，其特征在于，用于控制熒光蛋白在斑馬魚的小神經膠質細胞中的表達。
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