[發(fā)明專利]一種乳酸檢測試劑盒及其制備方法

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• 申請日: 2022-04-26
• 公開（公告）號: CN114778470A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設計）人: 李浩強;唐慧嫻;林帥
• 申請（專利權）人: 杭州皓陽生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 合肥正則元起專利代理事務所(普通合伙) 34160
• 代理人: 李敏

本發(fā)明公開了一種乳酸檢測試劑盒及其制備方法，屬于檢測試劑技術領域，包括R1試劑3mL、R2試劑1mL和標準品1mL；R1試劑中含有牛血清白蛋白、納米銀?海藻糖復合物和PEG4000；牛血清白蛋白可以防止酶的分解和非特異性吸附，螯合解離出的少量Ag⁺，防止與H₂O₂競爭辣根過氧化物酶的結合位點，保證醌亞胺的穩(wěn)定生成；PEG4000起到分散作用，協助納米銀?海藻糖復合物在乳酸氧化酶和辣根過氧化物酶的表面形成一層保護膜，保護兩種酶的蛋白質的結構，并且可以從周圍環(huán)境中捕獲電子，增加兩種酶在催化過程中酶活性中心的電子傳遞效率，從而進一步增加兩種酶的活性，提高試劑盒的靈敏度和準確度。

技術領域

本發(fā)明屬于檢測試劑技術領域，具體涉及一種乳酸檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

乳酸是一種含有羥基的羧酸，分子式為C₃H₆O₃。在細胞培養(yǎng)過程中，乳酸的累積會降低培養(yǎng)體系的pH值，從而影響細胞內酶的活性，抑制了細胞正常生長代謝，導致細胞酸化甚至死亡。所以在細胞培養(yǎng)過程中，細胞液乳酸的監(jiān)測與及時調控是維持細胞存活的關鍵因素，實現對乳酸代謝濃度的直接、非接觸及實時監(jiān)測對細胞培養(yǎng)而言具有重要意義。

目前細胞培養(yǎng)過程中乳酸含量主要通過全自動生化分析儀或紫外分光光度法檢測，檢測原理主要包括乳酸氧化酶法、乳酸脫氫酶法、固定酶電極技術等。受試樣中眾多共存組分的干擾，受檢測試劑盒靈敏度的影響，如果乳酸含量較少可能，可能無法及時檢出，影響細胞培養(yǎng)過程中對乳酸含量的準確監(jiān)測。所以需要一種靈敏度高的乳酸檢測試劑盒。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種乳酸檢測試劑盒及其制備方法，以解決背景技術中的問題。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術方案實現：

一種乳酸檢測試劑盒，包括R1試劑3mL、R2試劑1mL和標準品1mL。

將待測樣品與R1試劑混勻后在37℃的條件下孵育3min，然后加入R2試劑混勻后在37℃的條件下孵育4min，采用全自動生化分析儀檢測，記錄吸光度值A1，然后在相同條件下繼續(xù)孵育1min，記錄吸光度值A2，計算出待測樣品吸光度值(待測樣品吸光度值＝A2-A1)。

采用相同的方法將標準品與R1試劑和R2試劑孵育并計算出標準品吸光度值，然后計算出待測樣品中的乳酸濃度(乳酸濃度＝(待測樣品吸光度值/標準品吸光度值)×2.22，單位mmol/L)。

其反應原理為：乳酸和O₂在乳酸氧化酶的作用下產生丙酮酸和H₂O₂，H₂O₂、4-氨基安替比林和4-氯酚在辣根過氧化物酶的催化下產生醌亞胺、水和HCl。

R1試劑：乳酸氧化酶2000-3000U/L、酶結合穩(wěn)定劑15-16wt％、4-氨基安替比林0.8-0.82wt％、疊氮鈉0.8-1.2wt％、TritonX-100 0.8-1.2wt％，余量為0.5M Tris緩沖液。

R2試劑：辣根過氧化物酶2000U/L、4-氯酚6.9-6.95wt％、疊氮鈉0.8-1.2wt％，余量為磷酸鹽緩沖液。

標準品：L-乳酸鋰2.1wt％，濃硫酸0.046wt％，余量ddH₂O。

該乳酸檢測試劑盒的制備方法為：配制出0.5M Tris緩沖液和磷酸鹽緩沖液；取容量為5mL的試劑管，向其中加入0.5M Tris緩沖液，然后加入4-氨基安替比林、疊氮鈉、TritonX-100和酶結合穩(wěn)定劑，混合均勻后再加入乳酸氧化酶，用移液器吹打均勻，得到R1試劑；