[發(fā)明專利]一種乳酸檢測試劑盒及其制備方法

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• 申請日: 2022-04-26
• 公開（公告）號: CN114778470A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李浩強;唐慧嫻;林帥
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州皓陽生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 合肥正則元起專利代理事務所(普通合伙) 34160
• 代理人: 李敏

1.一種乳酸檢測試劑盒，其特征在于，包括R1試劑、R2試劑和標準品；

所述R1試劑包括乳酸氧化酶2000-3000U/L、酶結(jié)合穩(wěn)定劑15-16wt％、4-氨基安替比林0.8-0.82wt％、疊氮鈉0.8-1.2wt％、TritonX-1000.8-1.2wt％，余量為0.5M Tris緩沖液；

所述R2試劑包括辣根過氧化物酶2000U/L、4-氯酚6.9-6.95wt％、疊氮鈉0.8-1.2wt％，余量為磷酸鹽緩沖液；

所述標準品包括L-乳酸鋰2.1wt％、濃硫酸0.046wt％，余量ddH₂O。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳酸檢測試劑盒，其特征在于，酶結(jié)合穩(wěn)定劑的制備方法為：將牛血清白蛋白、PEG4000和納米銀-海藻糖復合物溶于0.5M Tris緩沖液中，獲得酶結(jié)合穩(wěn)定劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種乳酸檢測試劑盒，其特征在于，牛血清白蛋白、PEG4000、納米銀-海藻糖復合物和0.5M Tris緩沖液的用量比為1g：5g：5g：29mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種乳酸檢測試劑盒，其特征在于，納米銀-海藻糖復合物的制備方法為：將海藻糖用ddH₂O溶解，然后加入AgNO₃溶液混合后超聲分散5-10min，得到混合液，將混合液在功率為500W的氙氣燈下照射2-3h，在10000-13000r/min的條件下離心20-30min，收集沉淀用ddH₂O洗滌2-3次，干燥后獲得納米銀-海藻糖復合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種乳酸檢測試劑盒，其特征在于，海藻糖、ddH₂O、AgNO₃溶液的用量比為1g：50mL：50mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種乳酸檢測試劑盒，其特征在于，0.5M Tris緩沖液的配制方法為：取Tris置于燒瓶中，然后加入ddH₂O中，在室溫下攪拌溶解后滴加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.5-8，然后用ddH₂O定容，攪拌混勻后滅菌、過濾，得到0.5M Tris緩沖液并在室溫下保存。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳酸檢測試劑盒，其特征在于，磷酸鹽緩沖液的配制方法為：取磷酸二氫鉀加入氫氧化鈉溶液中，加入ddH₂O定容至200mL，滅菌、過濾，得到磷酸鹽緩沖液并在室溫下保存。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項所述的一種乳酸檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

取容量為5mL的試劑管，向其中加入0.5M Tris緩沖液，然后加入4-氨基安替比林、疊氮鈉、TritonX-100和酶結(jié)合穩(wěn)定劑，混合均勻后加入乳酸氧化酶，用移液器吹打均勻，得到R1試劑；

取容量為3mL的試劑管，向其中加入磷酸鹽緩沖液，然后加入4-氯酚和疊氮鈉，混合均勻后再加入辣根過氧化物酶，用移液器吹打均勻，得到R2試劑；

將乳酸鋰用ddH₂O溶解，然后加入濃硫酸，最后按照預設(shè)配比用ddH₂O定容得到標準溶液，吸取1mL的標準溶液置于容量為3mL的試劑管中，得到標準品。