[發明專利]刺老苞粗提取物對肌肉細胞增殖作用

在審

• 申請號: 202210449879.2
• 申請日: 2022-04-24
• 公開（公告）號: CN114908042A
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發明（設計）人: 裴凌鵬;翟晉娜;孫九許
• 申請（專利權）人: 中央民族大學
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 北京貴都專利代理事務所(普通合伙) 11649
• 代理人: 李新鋒

本發明涉及刺老苞研究技術領域，更具體的說是涉及一種刺老苞粗提取物對肌肉細胞增殖作用，本發明通過實驗證實了刺老苞粗提物在一定濃度范圍內可以促進成肌細胞的增殖，為今后開展刺老苞新的藥理作用研究，即肌肉減少癥的預防和治療提供了可靠的實驗數據支撐與理論依據。

技術領域

本發明涉及刺老苞研究技術領域,更具體的說是涉及刺老苞粗提取物對肌肉細胞增殖作用。

背景技術

刺老苞 Aralia echinocaulis Hand.-Mazz.為五加科楤木屬植物楤木Araliachinensis L.或棘莖楤木A. echinocaulis Hand. Mazz的根皮或莖皮[1]，在我國分布廣泛，生于森林中，垂直分布海拔可達2600 m[2]。刺老苞多根皮入藥，藥材呈片狀、塊狀或槽狀，氣微香，嚼之帶黏性，味辛，性平。歸脾、腎二經，功能滋陰健腎，祛風濕，壯筋骨，散瘀血，消腫毒，可用于風濕痹痛、跌打損傷、骨折等治療，臨床應用時外敷、內服皆可[3]。

《滇南本草》曰:“刺腦包，又名刺老苞、鵲不宿。味苦、辛，性涼。歸脾、腎經[4]。而脾主肌肉，腎主骨。目前對于刺老苞的研究多停留在骨質疏松、骨折等骨科疾病方面，而骨肌是一個有機整體，相互協調、密不可分[5]。在生長發育過程中肌量與骨量密切相關，老年期也是如此[6]。刺老苞根皮中主要含有皂苷、萜類、黃酮、鞣質等化學成分，具有保肝、抗炎、抗癌、提高免疫力等多種藥理活性[7]。其中，刺老苞根皮中總多糖、總黃酮的含量分別為7.33%及0.92%，鈣、鎂、銫、鎵、銅、鋅等無機元素含量較高，尤其是銅、鈣、銫元素的含量高過同類中草藥10多倍[8-9]。研究發現，刺老苞根皮含藥血清可通過延長原代成骨細胞 S 期，促進其增殖、分化及礦化功能的作用[10]，不同濃度刺老苞根皮醇提物可通過促進成骨細胞增殖和分化，加快骨基質礦化過程[11]。但關于刺老苞粗提物對肌肉細胞影響作用的研究幾乎沒有。

現階段關于刺老苞的研究，多集中在成骨細胞增殖分化、骨質疏松癥、骨折等骨科疾病方面，而關于其對成肌細胞增殖分化的研究幾乎沒有。目前已通過網絡藥理學初步證實刺老苞對肌肉減少癥有一定的影響。

本專利提供了一種刺老苞粗提物的新用途，即刺老苞根皮醇提物可以促進成肌細胞的增殖，用于預防或治療肌肉減少癥。這對于開發肌類疾病藥物提供了新的選擇。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種刺老苞粗提取物對肌肉細胞增殖的作用。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案，刺老苞粗提取物的制備方法包括以下步驟：

1）預先準備實驗材料及儀器；

2）對刺老苞根皮醇提物制備，以及對成肌細胞C2C12體外培養；

3）待C2C12細胞融合率達98%時，傳代培養，

傳代后的C2C12細胞接種于96孔板中，接種密度為5x10³ cm²，孔板周圍一圈鋪滿PBS，以防揮發，24小時后用不同濃度刺老苞根皮醇提物分別處理C2C12細胞，并設置調零孔和空白對照孔，每組6個復孔，藥物處理24 h后，每孔加入 10μl MTT 溶液和90μl基礎培養基，繼續培養4h后，加入DMSO溶解液，搖床搖勻10min；

4）在490nm處檢測吸光度，計算細胞活力，重復進行3次獨立實驗。