[發(fā)明專利]基因afsR_4突變及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210449351.5
• 申請日: 2022-04-26
• 公開（公告）號: CN114790436B
• 公開（公告）日: 2023-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊晟;楊俊杰;蔣宇;錢源
• 申請（專利權(quán)）人: 泰興市東圣生物科技有限公司;上海東之匯生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/31;C12N9/10;C12R1/465
• 代理公司: 上海申浩律師事務(wù)所 31280
• 代理人: 賈師英

1.一種提高茂源鏈霉菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶能力的方法，其特征在于，包括下述步驟：使茂源鏈霉菌基因組中的afsR_4基因功能失活或者afsR_4基因下調(diào)表達，所述茂源鏈霉菌是DSM?40587或者其衍生菌株TDS0025。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，afsR_4基因的功能失活選自下組方式：核苷酸序列全部刪除，核苷酸序列部分刪除，基因突變，閱讀框內(nèi)突變終止密碼子。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述基因突變發(fā)生在afsR_4基因的非編碼區(qū)和/或編碼區(qū)，選自下組方式：afsR_4基因的轉(zhuǎn)錄缺失；afsR_4基因的翻譯缺失；afsR_4基因的一個或多個密碼子的同義突變，導致高頻密碼子/常見密碼子/偏愛密碼子變成低頻密碼子/稀有密碼子/非偏愛密碼子；afsR_4基因的一個或多個密碼子的錯義突變，導致AfsR_4蛋白的活性降低或缺失；afsR_4基因讀碼框的移碼；它們中兩種以上的組合。

4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述基因突變選自下組方式：afsR_4基因原始序列SEQ?ID?NO:1第1085位堿基G發(fā)生突變或缺失，第1401位堿基C發(fā)生突變或缺失，第1409位堿基A發(fā)生突變或缺失，它們中兩種以上的組合。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述基因突變選自下組方式：afsR_4基因原始序列SEQ?ID?NO:1第1085位堿基由G突變?yōu)锳，第1401位堿基由C突變?yōu)門，第1409位堿基A缺失，它們中兩種以上的組合。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，使茂源鏈霉菌基因組中的afsR_4基因的核苷酸序列由SEQ?ID?NO:1突變?yōu)镾EQ?ID?NO:2，但谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的編碼基因不發(fā)生改變。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，afsR_4基因的下調(diào)表達選自下組方式：蛋白泛素化修飾，RNA干涉(RNAi)，表達系統(tǒng)發(fā)生結(jié)構(gòu)改變，轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生負性調(diào)控，轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)生負性調(diào)控，afsR_4基因的轉(zhuǎn)錄降低，afsR_4基因的翻譯降低，它們中兩種以上的組合。

8.一種谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶生產(chǎn)菌，其特征在于，按照如權(quán)利要求1-7中任一項所述的方法構(gòu)建得到。

9.如權(quán)利要求8所述的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶生產(chǎn)菌在生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，發(fā)酵產(chǎn)物谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶具有食品級安全性。