[發明專利]一種檢測糞便樣本中幽門螺桿菌耐藥基因突變試劑盒

在審

• 申請號: 202210447592.6
• 申請日: 2022-04-26
• 公開（公告）號: CN114592081A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 尤慧;楊希寅;馬竣;王春香
• 申請（專利權）人: 江蘇康為世紀生物科技股份有限公司;江蘇健為診斷科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12N15/11;C12Q1/6844;C12R1/01
• 代理公司: 南京禾祁專利代理事務所(普通合伙) 32462
• 代理人: 孫建朋

1.一種檢測糞便樣本中幽門螺桿菌耐藥基因突變試劑盒，其特征在于，包括檢測幽門螺桿菌23S rRNA基因2142、2143位點的A2142G、A2143G突變的引物探針，檢測幽門螺桿菌gyrA基因87位點的N87I、N87K突變的引物探針，檢測幽門螺桿菌gyrA基因91位點的D91N、D91Y、D91G突變的引物探針，檢測23S rRNA外控的引物探針，檢測gyrA外控的引物探針，DNA聚合酶，幽門螺桿菌陽性質控參考品和幽門螺桿菌陰性質控參考品。

2.根據權利要求1所述的一種檢測糞便樣本中幽門螺桿菌耐藥基因突變試劑盒，其特征在于，所述檢測幽門螺桿菌23S rRNA基因2142位點的A2142G突變的引物序列如SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2所示，探針序列如SEQ ID NO:3所示；所述檢測幽門螺桿菌23S rRNA基因2143位點的A2143G突變的引物序列如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8所示，探針序列如SEQ IDNO:3所示。

3.根據權利要求1所述的一種檢測糞便樣本中幽門螺桿菌耐藥基因突變試劑盒，其特征在于，所述檢測幽門螺桿菌gyrA基因87位點的N87I突變的引物序列如SEQ ID NO:9、SEQID NO:10所示，探針序列如SEQ ID NO:11所示；所述檢測幽門螺桿菌gyrA基因87位點的N87K突變的引物序列如SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13所示，探針序列如SEQ ID NO:11所示。

4.根據權利要求1所述的一種檢測糞便樣本中幽門螺桿菌耐藥基因突變試劑盒，其特征在于，所述檢測幽門螺桿菌gyrA基因91位點的D91N突變的引物序列如SEQ ID NO:14、SEQID NO:15所示，探針序列如SEQ ID NO:11所示；所述檢測幽門螺桿菌gyrA基因91位點的D91Y突變的引物序列如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17所示，探針序列如SEQ ID NO:11所示；所述檢測幽門螺桿菌gyrA基因91位點的D91G突變的引物序列如SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19所示，探針序列如SEQ ID NO:11所示。

5.根據權利要求1所述的一種檢測糞便樣本中幽門螺桿菌耐藥基因突變試劑盒，其特征在于，所述檢測23S rRNA外控的引物序列如SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21所示，探針序列如SEQ ID NO:3所示。

6.根據權利要求1所述的一種檢測糞便樣本中幽門螺桿菌耐藥基因突變試劑盒，其特征在于，所述檢測gyrA外控的引物序列如SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23所示，探針序列如SEQ ID NO:11所示。

7.根據權利要求1所述的一種檢測糞便樣本中幽門螺桿菌耐藥基因突變試劑盒，其特征在于，所述幽門螺桿菌陽性質控參考品為插入幽門螺桿菌23s rRNA基因和gyrA基因的載體質粒，所述23s rRNA基因序列如SEQ ID NO:24所示，所述gyrA基因序列如SEQ ID NO:25所示。

8.根據權利要求1所述的一種檢測糞便樣本中幽門螺桿菌耐藥基因突變試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括檢測內參質控基因的引物探針，所述內參質控基因為人ACTB基因；所述檢測內參質控基因的引物序列如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示，探針序列如SEQID NO:6所示。

9.根據權利要求1至8任意一項所述的一種檢測糞便樣本中幽門螺桿菌耐藥基因突變試劑盒，其特征在于，所述引物3’端引入硫代修飾，所述引物、探針濃度為100-400nM。

10.根據權利要求1至8任意一項所述的一種檢測糞便樣本中幽門螺桿菌耐藥基因突變試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括buffer緩沖液和dNTP，buffer組分包括Tris-HCl、土溫、甘油、氯化鎂、硫酸銨、氯化鉀、PVP、BSA，濃度分別為Tris-HCl 10-100mM，土溫0.01％-0.05％，甘油1％-10％，氯化鎂1-5mM，硫酸銨10-100mM，氯化鉀10-100mM，PVP濃度0.1％-0.5％，BSA濃度0.01％-0.3％，其中Tris-HClpH8.0-8.5。