[發(fā)明專利]調(diào)控植物花粉管與柱頭識別的硫氧還蛋白及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210446424.5
• 申請日: 2022-04-26
• 公開（公告）號: CN114774378A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 代新仁;孟文靜;高新起;李全梓;朱東姿
• 申請（專利權(quán)）人: 中國林業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12Q1/6895;C12R1/19
• 代理公司: 北京八月瓜知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11543
• 代理人: 袁曉雨

本發(fā)明提供了一種調(diào)控植物花粉管與柱頭識別的硫氧還蛋白及其制備方法，所述硫氧還蛋白的序列表如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示。所述硫氧還蛋白為含有序列表SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的真核重組表達質(zhì)粒pETrx轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α獲得的重組蛋白。通過用上述序列表的硫氧還蛋白能夠有效提升花粉在柱頭表面的水合和萌發(fā)以及花粉管在柱頭表面的生長。此外，本申請還提供了一種調(diào)控植物花粉管與柱頭識別的硫氧還蛋白的制備方法，該方法能夠精確的制得硫氧還蛋白，方便硫氧還蛋白的使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種調(diào)控植物花粉管與柱頭識別的硫氧還蛋白及其制備方法。

背景技術(shù)

植物授粉過程包括花粉在柱頭上的黏附、水合、萌發(fā)出花粉管、花粉管在花柱中極性生長、花粉管到達珠孔釋放精細胞與卵細胞、中央細胞融合等，這個過程受到許多基因精細而復(fù)雜的調(diào)控。授粉過程中，花粉(管)與柱頭細胞的識別決定花粉在柱頭表面的水合和萌發(fā)以及花粉管在柱頭表面的生長。

因此，如何通過花粉(管)與柱頭細胞的識別，以提升花粉在柱頭表面的水合和萌發(fā)以及花粉管在柱頭表面的生長，成為亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種調(diào)控植物花粉管與柱頭識別的硫氧還蛋白及其制備方法，以提升花粉在柱頭表面的水合和萌發(fā)以及花粉管在柱頭表面的生長。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明實施例提供如下技術(shù)方案：

根據(jù)本發(fā)明實施例的第一方面，提供一種調(diào)控植物花粉管與柱頭識別的硫氧還蛋白，所述硫氧還蛋白的序列表如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示。

進一步的，所述硫氧還蛋白為含有序列表SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的真核重組表達質(zhì)粒pETrx轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α獲得的重組蛋白。

進一步的，所述調(diào)控植物花粉管與柱頭識別的硫氧還蛋白的制備方法，包括以下步驟：

①用正向引物和反向引物進行PCR擴增cDNA，PCR產(chǎn)物純化后與載體pBS T連接，連接混合液轉(zhuǎn)化大腸桿菌，得質(zhì)粒pBSTrx；

②將質(zhì)粒pBSTrx和質(zhì)粒pET259用限制性內(nèi)切酶EcoRV酶切，酶切片段用T4DNA連接酶連接，連接液轉(zhuǎn)化入大腸桿菌，得質(zhì)粒pETrx；

③將質(zhì)粒pETrx轉(zhuǎn)化BL21(DE3)，所得轉(zhuǎn)化子BL21(DE3)/pETrx純化所得重組蛋白，制得氨基酸序列表如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的硫氧還蛋白；

所述正向引物的序列如SEQ ID No.5或SEQ ID No.6所示；

所述反向引物的序列如SEQ ID No.7或SEQ ID No.8所示；

使用序列SEQ ID No.5和SEQ ID No.7，制得的氨基酸序列表如SEQ ID No.1所示的硫氧還蛋白；

使用序列SEQ ID No.6和SEQ ID No.8，制得的氨基酸序列表如SEQ ID No.2所示的硫氧還蛋白。

進一步的，以擬南芥cDNA為模板。

進一步的，制備SEQ ID No.1所示硫氧還蛋白的插入突變體基因為gr1-1，制備SEQID No.2所示硫氧還蛋白的插入突變體基因為nrta-1。

進一步的，gr1-1插入到GR1的第三個內(nèi)含子序列中，ntra-1插入到NTRA的第1個外顯子序列中。

進一步的，GR1的基因序列表如SEQ ID No.3所示；NTRA的基因序列表如SEQ IDNo.4所示；