[發(fā)明專利]獼猴桃胞外囊泡及其在藥物載體中的應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210446091.6
• 申請日: 2022-04-26
• 公開（公告）號: CN114774348A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設計）人: 劉克海;方舟
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A61K47/46;A61K31/44;A61K9/127;A61P35/00
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產(chǎn)權代理有限公司 31227
• 代理人: 周一新

本發(fā)明公開了獼猴桃胞外囊泡及其在藥物載體中的應用，制備方法包括：挑選新鮮的獼猴桃去皮并擠壓，得到獼猴桃汁液，差速離心去除植物纖維、細胞碎片沉淀，得到的上清液過0.45μm濾膜，濾液超高速離心，得到低純度的獼猴桃胞外囊泡沉淀后溶解于PBS中，經(jīng)蔗糖濃度梯度離心法離心，收集30％?45％條帶的溶液，PBS沖洗，超高速離心，得到高純度的獼猴桃胞外囊泡。本發(fā)明從獼猴桃中分離得到獼猴桃胞外囊泡，用作藥物載體有助于協(xié)助藥物逃脫免疫系統(tǒng)的捕獲，延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時間。通過動物實驗發(fā)現(xiàn)，其能夠穿過腸道屏障表現(xiàn)出肝臟蓄積的能力，實現(xiàn)有效包封的同時還能減少藥物在胃腸道中的釋放。

技術領域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體涉及獼猴桃胞外囊泡及其在藥物載體中的應用。

背景技術

長期以來，許多藥物由于其較差的溶解性、穩(wěn)定性和較大的副作用等問題，嚴重限制了其在臨床上的應用，化學修飾和脂質體裝載等方法已經(jīng)被用來改善藥物的生物利用度，然而這些修飾方法依舊面臨著靶向性差和容易被免疫系統(tǒng)清除的問題。因此，開發(fā)一種生物相容性好、靶向性高的藥物載體十分重要。

近年來，關于胞外囊泡的研究受到廣泛關注。基于胞外囊泡的脂質雙分子層結構，其能夠實現(xiàn)對親水性藥物和疏水性藥物的裝載，在機體內(nèi)部表現(xiàn)出良好的生物穩(wěn)定性和生物相容性。此外，哺乳動物胞外囊泡表面存在的特殊蛋白，有助于其實現(xiàn)腫瘤靶向和免疫逃逸，已經(jīng)被用來加載各種藥物，增強藥物治療效果。不幸的是，哺乳動物胞外囊泡用于藥物遞送仍然面臨諸多障礙，如不耐受胃腸環(huán)境、產(chǎn)量低以及存在免疫原性等。

現(xiàn)有技術中，植物細胞被發(fā)現(xiàn)能夠分泌與哺乳動物胞外囊泡類似的EV，并且具有良好的藥物封裝能力以及靶向功能。獼猴桃被稱為“奇異果”、“水果金礦”、“VC之王”，有久遠的食藥應用歷史，意味著獼猴桃胞外囊泡(KEVs)具有相當?shù)陌踩浴＋J猴桃不僅含有豐富的營養(yǎng)成分，而且具有抗癌、抗氧化、抗炎等功能，研究表明植物來源的胞外囊泡會繼承源植物的部分生物活性功能，目前尚未見到對于獼猴桃胞外囊泡用作藥物載體的相關報道。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術中的不足，本發(fā)明的第一目的是提供一種獼猴桃胞外囊泡的制備方法。

本發(fā)明的第二目的是提供一種獼猴桃胞外囊泡，通過上述獼猴桃胞外囊泡的制備方法制得。

本發(fā)明的第三目的是提供上述獼猴桃胞外囊泡在藥物載體中的應用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案是：

本發(fā)明提供一種獼猴桃胞外囊泡的制備方法，包括如下步驟：

(1)挑選新鮮的獼猴桃去皮并擠壓，得到獼猴桃汁液；

(2)步驟(1)獲得的獼猴桃汁液經(jīng)過若干次由低到高的差速離心去除植物纖維、細胞碎片沉淀，得到上清液；

(3)步驟(2)獲得的上清液過0.45μm濾膜，濾液經(jīng)超高速離心，保留沉淀，得到低純度的獼猴桃胞外囊泡沉淀；

(4)步驟(4)獲得的低純度的獼猴桃胞外囊泡沉淀溶解于PBS中，經(jīng)蔗糖濃度梯度離心法離心，收集30％-45％條帶的溶液，經(jīng)PBS沖洗，超高速離心，得到高純度的獼猴桃胞外囊泡。

優(yōu)選地，步驟(1)中，獼猴桃去皮并擠壓后過200目濾布。

優(yōu)選地，步驟(2)中，所述差速離心的過程為：300g，10min×2；1000g，10min×2；3000g，10min×2；10000g，30min×2；20000g，30min×2。

優(yōu)選地，步驟(3)中，所述超高速離心為120000g離心2小時。

優(yōu)選地，步驟(4)中，所述蔗糖濃度梯度離心法中蔗糖濃度梯度分別為8％、15％、30％、45％和60％。

本發(fā)明還提供上述獼猴桃胞外囊泡在藥物載體中的應用。