[發明專利]一種復方氨基酸注射液中11種成份檢測方法

在審

• 申請號: 202210445842.2
• 申請日: 2022-04-26
• 公開（公告）號: CN114740119A
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 謝曉;李杰;戚雪勇;王剛
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 盧霞

本發明公開了一種復方氨基酸注射液中11種成份檢測方法，使用高效液相色譜法檢測復方氨基酸注射液（20AA）中11種成份，包括：8種氨基酸主成份即纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、乙酰半胱氨酸、苯丙氨酸、乙酰酪氨酸、色氨酸，兩種主要降解產物即乙酰胱氨酸和焦谷氨酸和一種附加成分即醋酸鹽。本發明色譜條件溫和，利于推廣和使用；且未采用衍生化試劑，延長色譜柱的使用壽命，并提高檢測結果的準確性；同時避免使用昂貴的儀器設備和分析柱，極大降低了檢測成本，可應用于復方氨基酸注射液成份的檢測。

技術領域

本發明涉及復方氨基酸注射液(20AA)中含量和有關物質檢測方法，屬于藥物質量測定方法技術領域。

背景技術

復方氨基酸注射液(20AA)是由20種氨基酸原料藥組合配制成的無菌水，主要用于嚴重肝功能不全和即將或者已經發展為肝性腦病患者的腸外氨基酸營養液；臨床上也會與維生素B6和葡萄糖等注射液聯合使用，以增加其作用與療效。由于復方氨基酸注射液(20AA)主成份多，制備工藝存在諸多因素影響其質量，中國藥典仍未收載該品種進行控制。

復方氨基酸注射液是多種氨基酸的混合物，現已廣泛地應用于醫藥行業，氨基酸分析技術對復方氨基酸藥品具有重要意義。由于氨基酸具有高極性、低揮發性、發色基團弱等特性，檢測方法困難，為其分離和檢測帶來不小的難度。專利CN105588900A公開了一種復方氨基酸注射液18AA-II含量測定方法，方法使用的氨基酸分析儀價格昂貴，離子交換樹脂柱費用高，使用了配制繁瑣的5種流動相，梯度洗脫時間需要54分鐘，且部分氨基酸無法達到基線分離。

李莉發表的“復方氨基酸注射液(18AA)中焦谷氨酸的限量檢查方法研究”一文，方法在26分鐘內只檢測了復方氨基酸注射液(18AA)中焦谷氨酸中一種成份。該現有技術因使用乙腈體作為流動相，導致洗脫能力太強，注射液中多種成份聚集在空白溶劑峰中未被分離開；存在不設置柱溫控制易使方法在不同室溫條件下運行出峰時間波動大等諸多問題。

發明內容

本發明目的在于提供一種復方氨基酸注射液中11種成份檢測方法，以克服現有技術存在的缺陷，從而提供一種操作簡便，準確度更高，通用性更好的測定復方氨基酸注射液(20AA)中8種氨基酸主成份(纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、乙酰半胱氨酸、苯丙氨酸、乙酰酪氨酸、色氨酸)，2種主要降解產物(乙酰胱氨酸和焦谷氨酸)和1種附加成分(醋酸鹽)的檢測方法。

為了解決以上技術問題，本發明采用緩沖鹽-甲醇體系的兩種流動相，配制簡單，從而將復方氨基酸注射液(20AA)中包括含量、有關物質和附加物等多種成份進行分離，可實現在25分鐘內檢測11份成份之多，大大提高了檢測效率，同時未使用成本高的儀器和色譜柱，更利于普及和推廣。本發明方法具有操作簡單，結果準確，適用性強等特點。本發明采用的技術方案如下：

一種復方氨基酸注射液中11種成份檢測方法，其特征在于，采用高效液相色譜法檢測8種氨基酸、2種降解產物和1種附加成份，具體包括以下步驟：

步驟一，配制纈氨酸、醋酸鹽、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、乙酰酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、乙酰半胱氨酸、乙酰胱氨酸和焦谷氨酸對照品溶液；濃度分別為：0.64mg/ml，0.18mg/ml，72μg/ml，0.52mg/ml，0.82mg/ml，52μg/ml，96μg/ml，90μg/ml，48μg/ml，2.4μg/ml和17μg/ml；其中醋酸鹽對照品配制采用醋酸鈉配制；

步驟二，以超純水將復方氨基酸注射液20AA稀釋17倍得供試品溶液；

步驟三，確定高效液相色譜條件，高效液相色譜法具體采用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱；

流動相A為磷酸鹽緩沖液(pH2.5)，流動相B為甲醇；流動相洗脫程序如下表所示：