[發明專利]水稻wx基因的檢測引物、檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202210443780.1
• 申請日: 2022-04-26
• 公開（公告）號: CN115491429A
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發明（設計）人: 倪大虎;周燃;宋豐順;甘泉;林翠香
• 申請（專利權）人: 安徽省農業科學院水稻研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

1.水稻wx基因的檢測引物，其特征在于，選自引物對(1)或引物對(2)中的任何一對，其中，所述引物對(1)由核苷酸序列為SEQ ID No.1所示的引物和核苷酸序列為SEQ ID No.2所示的引物組成；所述引物對(2)由核苷酸序列為SEQ ID No.3所示的引物和核苷酸序列為SEQ ID No.4所示的引物組成。

2.一種水稻wx基因PCR檢測試劑盒，包括：Taq酶、dNTP、Mg²⁺、去離子水和檢測引物；其特征在于，所述的檢測引物選自引物對(1)或引物對(2)中的任何一對，所述引物對(1)由核苷酸序列為SEQ ID No.1所示的引物和核苷酸序列為SEQ ID No.2所示的引物組成；所述引物對(2)由核苷酸序列為SEQ ID No.3所示的引物和核苷酸序列為SEQ ID No.4所示的引物組成。

3.權利要求1所述的檢測引物在判定水稻樣品中是否存在wx基因或者wx基因的純合體和雜合體中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，包括：

(1)提取待檢測水稻樣品的DNA；

(2)以提取的DNA為模板，以權利要求1所述的引物對(1)或引物對(2)為PCR擴增引物建立PCR擴增體系進行PCR擴增；

(3)利用引物(1)擴增，如果擴增結果只有140bp條帶，則待檢測的水稻樣品為含有wx基因純合體；如果擴增結果只有117bp條帶，則待檢測的水稻樣品不含有wx基因；如果擴增結果同時含有140bp和117bp兩條條帶，則待檢測的水稻樣品為含有wx基因的雜合株；

利用引物對(2)擴增，如果擴增結果只有199bp條帶，則待檢測的水稻樣品為含有wx基因純合體；如果擴增結果只有176bp條帶，則待檢測的水稻樣品不含有wx基因；如果擴增結果同時含有199bp和176bp兩條帶，則待檢測的水稻樣品為含有wx基因的雜合株。

5.權利要求1所述的檢測引物在水稻wx基因輔助選育中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，包括：

(1)用優良水稻品系與含有wx基因的糯稻材料雜交并回交，利用權利要求1所述的引物對(1)或引物對(2)擴增各雜交或回交世代單株wx基因位點，并對擴增的PCR產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳；

(2)利用引物(1)擴增，如果擴增結果含有140bp條帶，則可判斷樣品中存在wx基因，利用引物(2)擴增，如果擴增結果含有199bp條帶，則可判斷樣品中存在wx基因，輔助選育含有糯性基因且農藝性狀優良的單株。

7.權利要求1所述的檢測引物在判斷水稻自交分離群體單株是否為wx基因純合體中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，包括：

(1)提取待檢測的自交分離群體單株的DNA；

(2)以提取的DNA為模板，以引物對(1)或引物對(2)為PCR擴增引物建立PCR擴增體系進行PCR擴增；

(3)利用引物對(1)擴增，如果擴增結果只有140bp條帶，則檢測樣品單株為攜帶wx基因純合單株，如果擴增結果同時含有140bp和117bp兩條條帶，則檢測樣品單株為攜帶wx基因的雜合株；利用引物對(2)wx-2擴增，如果擴增結果只有199bp條帶，則檢測樣品單株為攜帶wx基因純合單株，如果擴增結果同時含有199bp和176bp兩條帶，則檢測樣品單株為攜帶wx基因的雜合株。

9.權利要求1所述的檢測引物在糯稻品種純度鑒定中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，于，包括：

(1)提取待檢測的糯稻品種的DNA；

(2)以提取的DNA為模板，以權利要求1所述的引物對(1)或引物對(2)為PCR擴增引物建立PCR擴增體系進行PCR擴增；

(3)利用引物對(1)擴增，如果電泳結果只有140bp條帶的為攜帶純合wx基因的糯稻單株，同時含有140bp和117bp兩條條帶的為攜帶雜合wx基因的糯稻單株，只含有117bp條帶的為非糯稻單株混雜；

利用引物對(2)擴增，如果電泳結果只有199bp條帶的為攜帶純合wx基因的糯稻單株，含有199bp和176bp兩條條帶的單株為攜帶雜合wx基因的糯稻單株，只含有176bp條帶的為非糯稻單株混雜；

(4)按以下公式計算水稻樣品純度：

式中：

P—樣品純度；

N_T—為供檢種子粒數(幼苗數、株數)；

N_D—為判定為混雜株的種子粒數(幼苗數、株數)。