[發明專利]一種檢測中東呼吸綜合征病毒的MERS凍干管及其制備方法、凍干試劑盒

在審

• 申請號: 202210441752.6
• 申請日: 2022-04-25
• 公開（公告）號: CN114807441A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 朱海
• 申請（專利權）人: 蘇州易科新創科學儀器有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 李遠星

本發明公開了一種檢測中東呼吸綜合征病毒的MERS凍干管及其制備方法、凍干試劑盒。一種檢測中東呼吸綜合征病毒的凍干試劑盒，所述試劑盒包括MERS凍干管、MERS陽性對照和陰性對照，所述MERS凍干管包括Taq酶、M?MLV逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、Buffer、引物探針混合物、dNTP、MgCl₂和凍干保護劑；所述凍干保護劑包括3?8％海藻糖、1?5％甘露醇、0.1?2％BSA、1?3％乳糖、0.05?0.2％tween80；所述MERS陽性對照包括具有目標基因的質粒。本發明將采用酶、buffer、引物探針、dNTP、凍干保護劑等全預混成凍干反應體系形成凍干型試劑盒，可于4?25℃穩定保存。如此，可以快速、高效、定性的檢測樣本中的中東呼吸綜合癥冠狀病毒，而且全封閉反應，僅一次加樣操作；本發明為凍干試劑盒，可實現常溫保存和運輸。

技術領域

本發明涉及中東呼吸綜合征檢測領域，具體涉及了一種檢測中東呼吸綜合征病毒的 MERS凍干管及其制備方法、凍干試劑盒。

背景技術

中東呼吸綜合征是冠狀病毒引起的病毒性肺炎的一種呼吸道傳染病。首先是2012年在沙特被發現的，它的癥狀類似于SARS，和最近流行的新型冠狀病毒肺炎，由于它是在中東地區發生的，所以稱之為MERS，MERS簡稱為MERS。癥狀和SARS還有新冠肺炎相似，主要都是發熱、咽痛、乏力、咳嗽，嚴重的情況可以出現呼吸困難、呼吸窘迫，甚至可以引起呼吸衰竭，嚴重的可以危及生命，也可以引起多臟器的損害。相對于SARS流行強度要弱一些，但是也是近幾年來比較著名的傳染病，共同的特點都是冠狀病毒的感染。

中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)屬于冠狀病毒科,β類冠狀病毒的2c亞群，是一種具有包膜、基因組為線性非節段單股正鏈的RNA病毒。病毒粒子呈球形，直徑為120-160nm。基因組全長約30kb。目前已經完成多株MERS-CoV的全基因組序列測定，目前可通過測序、熒光定量PCR等方法進行檢測，熒光定量PCR方法目前均采用液態反應體系試劑盒。

如中國發明專利CN109371174A公開的一種特異性檢測樣品中中東呼吸綜合征冠狀病毒的試劑盒，組分包括PCR反應液、酶混合液、陰性質控品和陽性質控品。其中PCR反應液主要含有相關的引物和探針、反應緩沖液、Mg²⁺和dNTP等，酶混合液主要含有逆轉錄酶和熱啟動Taq酶，陰性質控品為無RNase和DNase水，陽性質控品為含有中東呼吸綜合征冠狀病毒檢測靶序列的RNA。PCR反應液中用于核酸擴增的引物為P1和P2，P1和P2為針對中東呼吸綜合征冠狀病毒基因組群特異性保守序列設計并經預實驗篩選出的特異性引物；PCR 反應液中用于熒光信號監測的寡核苷酸探針為Probel，Probel為針對中東呼吸綜合征冠狀病毒基因組群特異性保守序列設計并經預實驗篩選出的特異性探針，其中熒光報告基團X1為FAM，熒光淬滅基團Y1為MGB。

又如中國發明專利CN105624335A公開了一種基因檢測中東呼吸綜合征冠狀病毒的試劑盒，特別是涉及一種利用多重實時熒光聚合酶鏈式反應技術同時檢測中東呼吸綜合征冠狀病毒UPE和N基因。試劑盒主要包括RT-PCR反應液、引物探針混合液、RT-PCR反應酶系、 DEPC H2O以及分隔并集中包裝這些試劑瓶或管的包裝盒。引物探針混合液由UPE和N基因特異性的正、反向引物，特異性的探針組成，其特征在于UPE基因特異性的正向和反向引物的序列分別是5’-TTTCCACTGTTTTCGTGCC-3’和5’-GACCCATAGTAGCGCAGAG-3’；UPE 基因特異性的探針的序列是5’-CAGTTCCTCTTCACATAATCGCCCCGAG-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團FAM和熒光淬滅基團BHQ1；N基因特異性的正向和反向引物的序列分別是5’-GTGCTGTTTCCTTTGCCGATA-3’和5’-GGTAAGCCCAGTGTACCAAG-3’；N基因特異性的探針的序列是5’-ACAGTGTTATTTGGTGCAGCTCGTGGTT-3’，探針的兩端分別結合有熒光發生基團HEX和熒光淬滅基團BHQ1。