[發(fā)明專利]一種檢測中東呼吸綜合征病毒的MERS凍干管及其制備方法、凍干試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210441752.6
• 申請日: 2022-04-25
• 公開（公告）號: CN114807441A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱海
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州易科新創(chuàng)科學(xué)儀器有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 李遠(yuǎn)星

1.一種檢測中東呼吸綜合征病毒的凍干試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括MERS凍干管、MERS陽性對照和陰性對照，所述MERS凍干管包括Taq酶、M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、Buffer、引物探針混合物、dNTP、MgCl₂和凍干保護(hù)劑；所述凍干保護(hù)劑包括3-8％海藻糖、1-5％甘露醇、0.1-2％BSA、1-3％乳糖、0.05-0.2％tween80；

所述MERS陽性對照包括具有目標(biāo)基因的質(zhì)粒；

所述引物探針混合物包括有正向引物、反向引物和寡核苷酸探針，且正向引物、反向引物和寡核苷酸探針的序列分別為：

正向引物序列：TTAGAGACTCCCTGCCGCTGTA

反向引物序列：GAATCTTTCTTCGCAATGCCTATG

寡核苷酸探針序列：CTTCACAAGGGTTTGTGGTGGTCAAT。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測中東呼吸綜合征病毒的凍干試劑盒，其特征在于，所述凍干保護(hù)劑為5％海藻糖、3％甘露醇、1％BSA、2％乳糖何0.1％tween80。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測中東呼吸綜合征病毒的凍干試劑盒，其特征在于，所述陰性對照為無菌TE溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測中東呼吸綜合征病毒的凍干試劑盒，其特征在于，所述寡核苷酸探針的3’端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)，5’端分別標(biāo)記有不同的熒光報告基團(tuán)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測中東呼吸綜合征病毒的凍干試劑盒，其特征在于，所述目標(biāo)基因為orf1ab基因。

6.一種檢測中東呼吸綜合征病毒的MERS凍干管，其特征在于，所述MERS凍干管包括Taq酶、M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、Buffer、引物探針混合物、dNTP、MgCl₂和凍干保護(hù)劑；所述凍干保護(hù)劑包括3-8％海藻糖、1-5％甘露醇、0.1-2％BSA、1-3％乳糖、0.05-0.2％tween80。

7.一種檢測中東呼吸綜合征病毒的MERS凍干管的制備方法，其特征在于，其包括以下步驟：

(1)配制凍干反應(yīng)體系：Taq酶、M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、Buffer、引物探針混合物、dNTP、MgCl₂和凍干保護(hù)劑；

(2)分裝：將步驟(1)的凍干反應(yīng)體系定量分裝到反應(yīng)管；

(3)凍干：將步驟(2)的反應(yīng)管置于冷凍干燥機進(jìn)行凍干程序，最后封裝。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測中東呼吸綜合征病毒的MERS凍干管的制備方法，其特征在于，每一所述反應(yīng)管內(nèi)裝有20μl所述凍干反應(yīng)體系。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測中東呼吸綜合征病毒的MERS凍干管的制備方法，其特征在于，所述凍干程序具體為：

A、預(yù)冷：板層預(yù)冷至3～5℃，保持9～10min；接著，冷卻至-50～-40℃，保持170～190min；

B、一次干燥：先在-45～-35℃進(jìn)行冷凍干燥180～220min；接著，升溫至-12～-8℃進(jìn)行冷凍干燥500～550min；

C、解析干燥：升溫至20～25℃，保持280～320min。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測中東呼吸綜合征病毒的MERS凍干管的制備方法，其特征在于，所述凍干程序具體為：

A、預(yù)冷：板層預(yù)冷至4℃，保持10min；接著，冷卻至-45℃，保持180min；

B、一次干燥：先在-40℃進(jìn)行冷凍干燥200min；接著，升溫至-10℃進(jìn)行冷凍干燥520min；

C、解析干燥：升溫至25℃，保持300min。