[發(fā)明專利]一種短DNA片段3’端生物素標(biāo)記的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210440516.2
• 申請(qǐng)日: 2022-04-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115058469A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐馳;白永生;莫蓓莘;唐玉林;史禮煜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P19/34
• 分類號(hào): C12P19/34;C12Q1/6816
• 代理公司: 北京市誠(chéng)輝律師事務(wù)所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種短DNA片段3’端生物素標(biāo)記的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)以待標(biāo)記DNA片段單鏈為短鏈，設(shè)計(jì)與短鏈部分互補(bǔ)的DNA單鏈為長(zhǎng)鏈，所述長(zhǎng)鏈從5’端到3’端方向包括第一序列和第二序列，所述第一序列與短鏈互補(bǔ)，且第一序列與短鏈互補(bǔ)配對(duì)后在第一序列5’端留出一個(gè)A堿基；

(2)配制DNA標(biāo)記的反應(yīng)體系；

(3)利用PCR儀進(jìn)行DNA標(biāo)記反應(yīng)，反應(yīng)條件如下，反應(yīng)結(jié)束后，即得3’端生物素標(biāo)記的DNA片段；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述短鏈的長(zhǎng)度為18-24bp；

所述長(zhǎng)鏈的長(zhǎng)度為50-59bp。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述短鏈的濃度為5-10mM；

所述長(zhǎng)鏈的濃度為5-10mM。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述Taq酶選自rTaq。

5.一種用于短DNA片段3’端生物素標(biāo)記的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括Taq酶、Taq酶Buffer、Biotin-11-dUTP和RNase free H₂O。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒用于短DNA片段3’端生物素標(biāo)記的操作如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)方法所述。

7.權(quán)利要求1所述方法或權(quán)利要求5所述試劑盒在Northern blot DNA探針生物素標(biāo)記中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述Northern blot DNA探針用于檢測(cè)microRNA的含量。