[發明專利]一種GTF2H4高表達的內皮細胞系

在審

• 申請號: 202210435411.8
• 申請日: 2022-04-24
• 公開（公告）號: CN115572730A
• 公開（公告）日: 2023-01-06
• 發明（設計）人: 李華;方哲彥;葛均波
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬中山醫院
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N5/10;C12N15/867;C12N15/66;C12N5/077
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

1.一種攜帶有3xflag標簽的GTF2H4 DNA雙鏈片段，其特征在于，其序列如SEQ ID NO：4所示。

2.一種表達載體，其特征在于，所述的表達載體包含如SEQ ID NO：4所示的目的基因序列。

3.如權利要求2所述的表達載體，其特征在于，所述的表達載體選自病毒、真菌或細菌表達載體。

4.一種包含權利要求2或3所述的表達載體的細胞，其特征在于，所述細胞為人微血管內皮細胞HMEC-1。

5.一種重組慢病毒表達載體的制備方法，其特征在于，包括：將慢病毒載體pHBLV-CMV-MCS-EF1-NEO通過限制性內切酶EcoRI和BamHI酶切后，將SEQ ID NO：4所示的DNA雙鏈片段克隆至酶切后的慢病毒載體，得到重組慢病毒載體。

6.一種GTF2H4高表達的人微血管內皮細胞系的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：將重組慢病毒載體聯合病毒包裝輔助質粒pSPAX2與pMD2G構成三質粒慢病毒系統進行病毒包裝，進而轉染293T細胞，獲得病毒液；所述的重組慢病毒載體為權利要求5所述的制備方法制備的重組慢病毒載體；

步驟2：用步驟1獲得的病毒液感染微血管內皮細胞系，篩選獲得GTF2H4高表達的微血管內皮細胞系，即GTF2H4高表達的微血管內皮細胞系。

7.權利要求2或3所述的表達載體，權利要求5所述的制備方法制備的重組慢病毒載體在下列A1)A10)中的任意一項中的應用：

A1)：制備用于促進GTF2H4表達的試劑；

A2)：制備用于促進缺氧條件下微血管內皮細胞發生內皮間質轉分化的產品；

A3)：制備用于促進缺氧條件下微血管內皮細胞遷移能力的產品；

A4)：制備用于抑制缺氧條件下微血管內皮細胞成管能力的產品；

A5)：制備用于構建GTF2H4高表達的細胞模型或動物模型的產品；

A6)：體外促進GTF2H4表達；

A7)：體外促進缺氧條件下微血管內皮細胞發生內皮間質轉分化；

A8)：體外促進缺氧條件下微血管內皮細胞遷移能力；

A9)：體外抑制缺氧條件下微血管內皮細胞成管能力；

A10)：構建GTF2H4高表達的細胞模型。

8.權利要求4所述的細胞在下列B1)-B7)中的任意一項中的應用：

B1)：制備用于促進缺氧條件下微血管內皮細胞發生內皮間質轉分化的產品；

B2)：制備用于促進缺氧條件下微血管內皮細胞遷移能力的產品；

B3)：制備用于抑制缺氧條件下微血管內皮細胞成管能力的產品；

B4)：制備用于構建GTF2H4高表達的動物模型的產品；

B5)：體外促進缺氧條件下微血管內皮細胞發生內皮間質轉分化；

B6)：體外促進缺氧條件下微血管內皮細胞遷移能力；

B7)：體外抑制缺氧條件下微血管內皮細胞成管能力。

9.權利要求5所述的GTF2H4高表達的人微血管內皮細胞系的制備方法制備的GTF2H4高表達的人微血管內皮細胞系在下列C1)-C7)中的任意一項中的應用：

C1)：制備用于促進缺氧條件下微血管內皮細胞發生內皮間質轉分化的產品；

C2)：制備用于促進缺氧條件下微血管內皮細胞遷移能力的產品；

C3)：制備用于抑制缺氧條件下微血管內皮細胞成管能力的產品；

C4)：制備用于構建GTF2H4高表達的動物模型的產品；

C5)：體外促進缺氧條件下微血管內皮細胞發生內皮間質轉分化；

C6)：體外促進缺氧條件下微血管內皮細胞遷移能力；

C7)：體外抑制缺氧條件下微血管內皮細胞成管能力。