[發(fā)明專利]一種雙酚AF半抗原的制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210432571.7
• 申請日: 2022-04-24
• 公開（公告）號: CN114524726B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邵兵;姚凱;張晶;尹杰;楊蘊(yùn)嘉
• 申請（專利權(quán)）人: 北京市疾病預(yù)防控制中心
• 主分類號: C07C65/24
• 分類號: C07C65/24;C07C51/09;C07K14/435;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K16/44;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 北京中知星原知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11868
• 代理人: 王維佳

一種雙酚AF半抗原，結(jié)構(gòu)如下式(I)所示。本發(fā)明制備得了一種雙酚AF半抗原，動物免疫后結(jié)果顯示，該半抗原結(jié)構(gòu)偶聯(lián)蛋白后制得的抗原進(jìn)行免疫，更易于誘導(dǎo)產(chǎn)生親和力和靈敏度俱佳的單克隆抗體。將該性能優(yōu)異的單克隆抗體用于制備免疫親和柱，高效凈化12類不同食品中的雙酚AF，配合超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行檢測，建立快速、靈敏度高、精密度好和凈化效果卓越的痕量檢測方法。以本發(fā)明雙酚AF半抗原最終制備得到的免疫親和柱用于雙酚AF的檢測，靈敏度和準(zhǔn)確性高，LOD和LOQ低，可以用于復(fù)雜基質(zhì)，比如食品中特異性地痕量雙酚AF的快速、準(zhǔn)確的檢測。（I）。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請涉雙酚衍生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種雙酚AF半抗原的制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著現(xiàn)代工業(yè)化進(jìn)程的推進(jìn)，大量的化學(xué)物質(zhì)被排放入環(huán)境，其中一些化學(xué)物質(zhì)能模擬或干擾內(nèi)分泌系統(tǒng)并對人類和野生動物的生殖與發(fā)育等造成危害，因此被稱為“內(nèi)分泌干擾物”。2012年世界衛(wèi)生組織已經(jīng)將70多種化學(xué)物質(zhì)列入內(nèi)分泌干擾物的范疇，其中的雙酚A [學(xué)名：2，2-二（4-羥基苯基）丙烷；Bisphenol A, BPA]是已被證實(shí)的典型內(nèi)分泌干擾物。在工業(yè)上BPA被用來合成聚碳酸酯和環(huán)氧樹脂等材料。廣泛的應(yīng)用于食品包裝材料、食品貯藏容器以及工業(yè)洗滌劑、塑料增塑劑和穩(wěn)定劑等，并且已經(jīng)在各種食品和環(huán)境基質(zhì)（如水產(chǎn)品、水體、土壤和沉積物）中都檢測到BPA的存在。人類通過攝入被污染的食品而暴露于這類物質(zhì)中，據(jù)報(bào)道人體的尿液、血清和母乳中都存在著不同水平的BPA。隨著不含BPA商品的需求量不斷增加以及相關(guān)部門對使用BPA的限制，擁有兩個酚環(huán)結(jié)構(gòu)的BPA類似物由于其物理、化學(xué)性質(zhì)與BPA類似，出現(xiàn)在人們的視野中。雙酚AF，又名BPAF，作為BPA的替代物在工業(yè)生產(chǎn)中使用。BPAF [學(xué)名：2,2'-二(4-羥基苯基)-六氟丙烷）]用于電子纖維、光學(xué)纖維的交聯(lián)劑，制備聚酰亞胺、聚酰胺和聚碳酸酯等時所用的單體。有研究表明，即使在每日允許攝入量的1/1000暴露水平，BPAF依然能對大腦發(fā)育和行為產(chǎn)生可測量的危害效應(yīng)，該研究利用斑馬魚做模式生物，為低劑量的BPAF不利于大腦發(fā)育并引起多動癥的有關(guān)機(jī)制提供了證據(jù)。還有文獻(xiàn)表明，微量的BPAF會誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞、前列腺細(xì)胞增殖，降低學(xué)習(xí)記憶能力而且不可恢復(fù)。同時，相關(guān)研究也證實(shí)，BPAF同樣具有不弱于BPA的雌激素活性，還具有較強(qiáng)的抗雄性激素活性，與雌激素受體結(jié)合，產(chǎn)生類雌激素效應(yīng)，有研究表明水體中微量的雙酚AF會對雄性斑馬魚的甲狀腺組織和激素水平產(chǎn)生影響，因此BPAF作為BPA替代物的產(chǎn)品也不能消除健康風(fēng)險(xiǎn)。通過與含BPAF的食品包裝材料或日用品接觸以及從被污染的土壤、空氣和水等發(fā)生遷移，BPAF可以遷移并富集到包裝的食品以及食品原材料中。現(xiàn)有研究表明，BPA及其類似物BPAF在各類食物中廣泛存在，濃度水平多為μg/kg水平。

因此對食物中BPAF的污染水平進(jìn)行準(zhǔn)確測定對于監(jiān)測BPAF對人群健康風(fēng)險(xiǎn)是非常必要的。當(dāng)前關(guān)于食品中BPAF測定的主要前處理方法有液-液萃取法、固相萃取法等，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜或氣相色譜質(zhì)譜法檢測。

專利CN102692474A公開了一種食品中雙酚AF的快速檢測方法，其是以離子液體為萃取劑，之后分離得到萃取液后進(jìn)行HPLC的定量分析，但是該方法的靈敏度低，適用的食品種類少。而且離子液體作為萃取液，會極大提升檢測的成本，并不經(jīng)濟(jì)，不利于產(chǎn)業(yè)化。

由于食品樣品成分復(fù)雜，以上的凈化方法選擇性差、操作繁瑣，針對不同的食品樣品常需要多種凈化手段才可達(dá)到檢測目的，凈化效果也直接影響測定方法的靈敏度和準(zhǔn)確度。因此有必要利用抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，開發(fā)凈化效果卓越的免疫親和色譜技術(shù)。抗體是免疫親和色譜技術(shù)和免疫分析方法的關(guān)鍵試劑。直接決定分離凈化效果和分析方法的特異性和靈敏度等。專利CN109425734A公開了一種雙酚A及其類似物的半抗原，其中化合物作為雙酚AF的半抗原，用于制備免疫親和柱。但用于檢測雙酚AF，特別是在復(fù)雜基質(zhì)中雙酚AF，檢測限還比較高，比如對于食品中痕量的雙酚AF，結(jié)果還不能令人滿意。

發(fā)明內(nèi)容